系统性红斑狼疮血管炎相关自身抗原的血清学筛选
【摘要】:目的 血管炎是系统性红斑狼疮(SLE)主要的发病机制之一。但目前对于与SLE血管炎相关的自身抗体尚不清楚,不能对其进行早期诊断、及时治疗和判断预后。本研究拟利用SEREX技术筛选与SLE血管炎相关的自身抗原,进一步证实SEREX筛选自身免疫性疾病相关自身抗原(自身抗体)的可行性;通过对筛选出自身抗原的功能分析,找出有助于SLE诊断、治疗和判断预后的自身抗体。
方法 收集四川大学华西医院2004年10月至2005年1月SLE住院病人血清作为筛选血清。病例入选标准:(1)符合美国风湿病学会(ACR)1982年制定的SLE诊断标准,且免疫学检查ANA滴度≥1∶320;(2)不伴有感染或者其它自身免疫性疾病。将8例SLE患者的混合血清作为筛选血清。利用人微血管内皮细胞cDNA文库(HMVEC),采用SEREX技术进行血清学筛选。筛选出的阳性克隆经内部剪切、酶切鉴定及核苷酸序列测定,最后采用NCBI的网上序列分析软件BLAST进行生物信息学分析。有意义的阳性克隆再分别利用正常人血清和单个SLE病人血清重复筛选一次,以排除假阳性克隆。
结果 1.第一轮共筛选出18个阳性反应克隆。经过第二轮筛选,获得11个克隆为非自身IgG克隆。2.11个阳性克隆经内部剪切、酶切鉴定及核苷酸序列测定,最后通过BLAST软件进行生物信息学分析发现,11个阳性克隆cDNA序列与3个已知的人类基因序列具有较高的同源性,核苷酸序列相似性分别为95%~99%。3.5个阳性克隆cDNA序列与人类