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双酚A影响大鼠雄性子代脑多巴胺神经系统发育和功能的机理研究

林勇  
【摘要】:目的: 多项动物实验行为检测结果表明,脑发育期暴露于双酚A可影响与脑多巴胺系统有关的行为如多动症等,而导致这些行为改变的机理目前还不清楚。本研究分别采用原代培养的胎鼠脑多巴胺神经元和围生期双酚A暴露的动物模型,从基因、细胞和整体动物水平探讨双酚A影响大鼠雄性子代脑多巴胺神经系统发育和功能的机理。 方法: 第一部分体外实验:用原代培养的胎鼠脑多巴胺神经元探讨双酚A对神经细胞的损伤机制。 1.建立胎鼠脑多巴胺神经元无血清体外培养模型:取孕14~15天SD大鼠的胎仔,以DMEM/F12含血清培养基接种,体外培养1天后换为Neurobasal+B27的无血清培养基,以后隔日换液。分别于体外培养第4天和第7天时用GFAP、NSE、TH免疫组化鉴定细胞类型、神经细胞纯度和其中多巴胺神经元的比例;经多次实验后使操作过程、培养条件和多巴胺神经元的比例达到稳定。 2.用MTT试验探讨双酚A对神经细胞的毒性作用和确定进一步实验采用的剂量范围; 3.双酚A对神经细胞的氧化损伤作用检测:细胞于体外分别培养4天和7天后,分别加入0,1,10,25,50,100μM双酚A,继续培养24h和


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