一株产几丁质酶细菌的鉴定、酶的性质及其基因的克隆与表达

【摘要】：几丁质酶(chitinase Ec．3．2．14)能够催化几丁质水解为几丁寡糖和N-乙酰氨基葡萄糖，广泛存在于各种微生物、植物及动物细胞和组织中，参与多种生理过程。由于几丁质酶在生物防治和处理几丁质废物等方面具有巨大的应用潜力，因而受到广泛的重视。 为了充分利用产几丁质酶微生物在生物防治中的潜力，作者用蛆蝇源几丁质作为筛选培养基，从土壤中初筛到51株产几丁质酶微生物，并通过生物测定法，复筛到一株对蝗虫有较高致死率的细菌C4。此外，通过观察蝗虫的中肠组织切片进行了初步的组织病理学研究。研究发现在饲喂经几丁质诱导的C4菌液12小时后，蝗虫的中肠围食膜基本被破坏；在48小时后，中肠组织出现明显的组织病理症状。为确定该菌的分类地位，对细菌C4进行了形态学观察、生理生化指标测定及分子生物学鉴定。16S rDNA序列分析显示该菌与Sanguibacter，Oerskovia和Cellulomonas三个属有较高的序列同源性，同源性分别为95.2-96.1％、95.4％和93.6-95.2％。结合表型特征和16S rDNA序列分析，细菌C4最接近Sanguibacter属，因此初步将其归为Sanguibacter属，命名为Sanguibacter sp．C4。分别将经几丁质诱导的C4菌液(酶活力：1.16 U／mL)和未诱导的菌液饲喂蝗虫，诱导组蝗虫的死亡率(61.1％)明显高于未诱导组(35.6