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节律基因mPer2对肿瘤细胞γ射线损伤敏感性的影响及其择时放疗的初步研究

朱彬  
【摘要】: 目的: 放射治疗是肿瘤治疗的主要手段之一,大约70%的肿瘤患者需要放疗的介入。理论上,足够大的放射剂量能够杀死所有肿瘤细胞,但周围正常组织的放射损伤限制了肿瘤治疗剂量的进一步增加,在有限治疗剂量下,寻求能够影响细胞对射线敏感性的干预措施,无疑将对肿瘤的治疗具有重要意义。时间生物学研究发现,生物体正常组织及肿瘤组织在细胞生理、生化等生长代谢的生命活动中均存在生物节律性,根据生物体的节律特征进行施治,已证实可以提高疗效并且降低机体对治疗措施本身的毒副反应。本课题即首先探讨了主要生物节律基因之一mPer2对60Co-γ射线敏感性的影响,通过对细胞增值以及DNA损伤程度对mPer2影响细胞射线敏感性的高低作出判断,进而在体内、体外肿瘤细胞mPer2节律表达的不同时间对细胞及荷瘤动物进行照射,观察择时放射对肿瘤细胞及肿瘤组织生长情况以及不同时间照射对小鼠毒副作用的影响,最后采用分子生物学、细胞生物学的研究方法对mPer2在射线照射过程中对其下游钟控基因,包括DNA损伤修复基因,细胞增殖、凋亡等相关基因表达的调控及可能的信号传导通路进行探讨,阐明节律基因mPer2影响细胞射线损伤敏感性的分子作用机制,为肿瘤的治疗开辟新的途径。 方法: 1采用脂质体介导的方法将构建好的mPer2基因重组表达质粒pcDNA3.1(+)-mPer2转染入肿瘤细胞,并以pcDNA3.1(+)-vector空载体及单独加入脂质体空白组为对照,通过克隆形成实验检测不同剂量照射下细胞的克隆形成率,进一步通过生存拟合曲线得出相应放射生物学参数(D0、Dq及N值),同时通过DNA断片分析及单细胞凝胶电泳实验观察不同组细胞受射线照射后


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