重组腺病毒介导人TIMP-1基因抑制肝癌侵袭和转移的实验研究
【摘要】：目的 肝癌细胞对细胞外基质(ECM)的降解是导致肝癌生长、浸润及转移的重要因素，而基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制因子(TIMPs)在此过程中起着关键作用。本实验通过构建携带人TIMP-1全长cDNA的重组腺病毒AdhTIMP-1，作用于人肝癌细胞株以及肝癌地位模型，探讨其抑制人肝癌细胞侵袭和转移的作用机制。
方法 从人肝细胞癌(HCC)组织中提取总RNA，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)合成人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)全长cDNA。测序正确后将其正向克隆到腺病毒载体AdEasy~(TM)系统中穿梭质粒pAdTrack-CMV的多克隆位点(MCS)，与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组，经HEK293细胞包装生成携带人TIMP-1的重组腺病毒AdhTIMP-1。用感染复数(MOI)为100的AdhTIMP-1转染人肝癌细胞株(HepG2)：PCR鉴定重组病毒；荧光计数测定重组病毒滴度；Western Blot检测培养液上清中TIMP-1蛋白的表达；半定量RT-PCR检测TIMP-1 mRNA在不同培养时相下的表达；透射电镜观察细胞超微结构变化；MTT实验及生长曲线监测细胞的生长和增殖；Boyden Chamber检测细胞体外侵袭人工基底膜(Matrigel)的能力；裸鼠成瘤实验观察AdhTIMP-1对裸鼠移植性HCC的影响以及抗肿瘤转移的作用；抗CD34单克隆抗体检测肿瘤组织中微血管密度(MVD)判断微血管对肿瘤恶性进程的影响。
结果 构建携带人TIMP-1全长cDNA的重组腺病毒AdhTIMP-1，
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| 1 |
史久华;;血清免疫反应性降钙素——肝细胞癌的一种新标志[J];国外医学.内科学分册;1981年02期 |
| 2 |
周英杰;;共济失调-毛细血管扩张症并发肝细胞癌[J];中国综合临床;1981年04期 |
| 3 |
赵德明;;对肝细胞癌经导管动脉栓塞与一次注射化疗的临床评价[J];国际肿瘤学杂志;1989年02期 |
| 4 |
韩秀霞;;一种治疗肝癌有效的混合物[J];国外医学情报;1989年08期 |
| 5 |
白振明;;CT、血管造影对日本血吸虫病合并肝细胞癌的形态学研究[J];国外医学.临床放射学分册;1990年03期 |
| 6 |
马炬明;;细针肝穿诊断AFP值正常肝细胞癌25例[J];浙江医学;1990年03期 |
| 7 |
路福顺;;小儿乙型肝炎病毒携带者与肝癌[J];国际儿科学杂志;1990年05期 |
| 8 |
陆士中;顾公望;;罕见的肝脏肿瘤及其诊断[J];临床肝胆病杂志;1991年02期 |
| 9 |
马昌庭;马一夫;;丙型肝炎病毒与肝细胞癌—肝细胞癌的新危险因子[J];宁夏医学杂志;1991年03期 |
| 10 |
黄道远,汪苏玉;肝细胞癌与转移性肝癌的超声鉴别[J];医学临床研究;1993年S1期 |
| 11 |
张清泉;隐性乙型病毒性肝炎与原发肝细胞癌[J];吉林大学学报(医学版);1993年04期 |
| 12 |
陈心;;慢性肝病患者的丙型肝炎抗体与肝细胞癌[J];福建医药杂志;1993年01期 |
| 13 |
姜锦贵,周晓军,孙桂勤,陆珍凤;CD_(34)在肝细胞癌诊断中的价值[J];江苏医药;1998年02期 |
| 14 |
Histoshi Someda
,Fuminori Moriyazu
,Noriyuki Hamato
,Masaxumi Fujimoto
,Mimoru Okuma
,郝彦威;利用多普勒超声探测肝细胞癌引起的肝动脉血液动力学改变[J];实用医学影像杂志;1998年02期 |
| 15 |
张健;;表现为肝脓疡的肝细胞癌特征及诊治[J];传染病信息;1998年03期 |
| 16 |
龚新雷,罗荣城;HBsAg与肝癌的关系[J];国外医学.肿瘤学分册;2000年05期 |
| 17 |
王元正,兰鸿芳;65例大(巨)肝癌切除体会[J];四川肿瘤防治;2000年03期 |
| 18 |
吴高松,邸方,邹声泉;环氧合酶在肝细胞癌中的表达及其临床意义[J];华中科技大学学报(医学版);2002年06期 |
| 19 |
刘智敏,严律南,汤宇,赵永恒,阳斌;血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在肝细胞癌中的表达及其意义[J];中国普外基础与临床杂志;2002年06期 |
| 20 |
李玉亮;肝细胞癌血管内栓塞治疗进展[J];中国医学影像技术;2002年03期 |
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