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CODIS系统三个miniSTR荧光标记复合扩增的构建及法医学应用

龙兵  
【摘要】: 目的对THO1、TPOX、CSF1PO三个基因座PCR-miniSTR和普通引物PCR-STR的结果进行一致性检验;构建THO1、TPOX、CSF1PO三个基因座miniSTR荧光标记复合扩增体系;对该荧光标记复合扩增体系进行法医学应用性研究。方法参照Bulter等对THO1、TPOX、CSF1PO三个基因座miniSTR的引物设计,选用本教研室提供的123例无血缘关系个体的血样,进行THO1、TPOX、CSF1PO三个基因座PCR-miniSTR银染检测,检测结果与商品化试剂盒的检测结果进行一致性检验;采用国产DNA聚合酶构建miniSTR荧光标记复合扩增体系,用美国ABI-310基因分析仪进行检测;对该荧光标记复合扩增体系的灵敏度、准确性、种属特异性、不同退火温度下复合扩增的效果、陈旧血痕DNA的检测等进行研究。结果123例无血缘关系个体的THO1、TPOX、CSF1PO三个基因座PCR-miniSTR银染检测结果与商品化试剂盒检测结果一致;成功建立了THO1、TPOX、CSF1PO三个基因座miniSTR荧光标记复合扩增体系,该体系的的退火温度范围较宽,以60℃为最佳,检测灵敏度为0.25ng模板DNA,扩增准确性高,具有较高的种属特异性,可以应用于陈旧血痕DNA检测。结论THO1、TPOX、CSF1PO三个基因座PCR-miniSTR结果可以与该三个基因座普通引物PCR-STR的结果进行比对,具有数据库兼容性;该荧光标记复合扩增体系可应用于ABI-310检测平台,扩增灵敏度高,条件易于优化、分型结果稳定,种属特异性好,可应用于法医学实际检案。


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