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PVL新生大鼠脑组织ephrin-B3mRNA表达及神经细胞凋亡变化

肖琴  
【摘要】: 目的 1.建立新生大鼠脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia,PVL)模型,观察新生大鼠PVL时脑组织病理学改变。 2.研究正常新生大鼠和PVL大鼠不同时间点脑组织ephrin-B3mRNA的表达变化,以及神经细胞凋亡的变化。 3.探讨ephrin-B3与神经细胞凋亡的关系。 4.探讨ephrin-B3在PVL损伤及CNS神经再生抑制机制中的意义。 方法 160只2日龄新生SD大鼠,随机分为2组,实验组(PVL组)86只,对照组(假手术组)74只,缺氧缺血(Hypoxic-ischemic,HI)后实验组死亡14只,对照组死亡2只,故进入实验的两组均为72只。采用Back等的方法建立PVL模型,分别于缺氧后0h、8h、24h、48h、72h、7d处死,HE染色观察新生大鼠PVL时脑组织病理学改变;DAPI染色检测缺氧缺血后不同时间点神经细胞凋亡;荧光定量RT-PCR检测缺氧缺血后不同时间点脑组织ephrin-B3mRNA表达变化。SPSS11.0进行统计分析,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 1.脑组织HE染色光镜观察:对照组细胞排列有序、胞核大、左右侧脑室对称。PVL组缺氧缺血后24h即见胼胝体细胞稀疏、排列紊乱;48小时纹状体内细胞稀疏、出现核固缩;7d可见侧脑室旁白质呈筛网状坏死。 2.ephrin-B3mRNA的表达变化:对照组大鼠脑白质中ephrin-B3mRNA表达各时间点无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);实验组大鼠脑白质中ephrin-B3mRNA表达在缺氧缺血后8h开始升高,72小时达到峰值,7天开始下降,组内不同时间点两两比较,差异有统计学意义(P<0.05),与对照组比较,在8h、24h、48h、72h、7d差异有统计学意义(P<0.05)。 3.细胞凋亡检测:对照组大鼠脑室周围白质纹状体、胼胝体区在各个时间点均有少量凋亡细胞,实验组大鼠纹状体和胼胝体区细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)在缺氧缺血后8小时开始升高,48小时达到高峰,72小时开始降低,与对照组相比,在8h、24h、48h、72h差异有统计学意义(P<0.05),7天时与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 1.脑组织HE染色光镜观察发现实验组大鼠缺氧缺血后出现细胞稀疏、排列紊乱、核固缩、侧脑室旁白质筛网状坏死,符合PVL病理改变,且出现生长发育不良、神经行为异常,证实PVL模型制作成功。 2.新生大鼠PVL时,脑白质ephrin-B3mRNA表达显著增加,而对照组ephrin-B3mRNA表达几乎没有变化,提示ephrin-B3参与了PVL缺氧缺血性脑损伤,可能与CNS神经元再生抑制机制有关。 3.新生大鼠PVL时,脑组织细胞凋亡指数较对照组明显增加,证实细胞凋亡仍为未成熟鼠脑缺氧缺血(Hypoxic-ischemic,HI)损伤的主要病理形式,其参与了PVL的损伤过程。 4.新生大鼠PVL时,脑组织细胞凋亡指数和ephrin-B3mRNA表达均呈先升高后降低的趋势,提示两者存在一定的相关性,但二者高峰时间并不重合,推测除了ephrin-B3还存在其它因素参与神经细胞凋亡损伤。


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