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脱细胞SIS作为真皮替代物的实验研究

赵善军  
【摘要】: 目的探讨脱细胞SIS作为真皮替代物的可行性。 方法1、取自健康家猪的空肠,去除浆膜、肌层和黏膜,并采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL联合脱细胞的方法处理制备脱细胞SIS。对其理化性能、组织学结构及微生物学进行检测。 2、实验室内以脱细胞SIS为真皮支架与人表皮细胞复合培养构建复合皮。通过MTT检测、组织学观察、免疫组化检测及扫描电镜观察,了解细胞生长情况及复合皮结构。 3、SD大鼠背部形成全层皮肤缺损创面。实验组用脱细胞SIS作为真皮替代物与SD大鼠自体刃厚皮片进行复合移植修复创面;对照组单纯以自体刃厚皮片进行移植修复创面。观察两组创面愈合的质量及组织学变化。 结果:1、脱细胞SIS厚度约0.1cm,为半透明状、黄白色、质地柔软、弹性好的膜状结构。脱细胞SIS内无细胞,具有多空隙的三维网状空间结构。微生物学检测无微生物污染。 2、人表皮细胞在脱细胞SIS上能黏附、生长,MTT法检测结果,复合培养组与单纯人表皮细胞培养组在各时间点的A570值(0D值)无统计学意义(P>0.05)。说明脱细胞SIS对人表皮细胞增殖无促进作用,但也无毒性作用,生物相容性好。HE染色和Masson染色组织学观察,可见脱细胞SIS呈胶原网状纤维结构,其内无细胞结构,脱细胞SIS表面有一层细胞结构。角蛋白免疫组化检测证实脱细胞SIS表面生长的细胞是表皮细胞。扫描电镜下可见脱细胞SIS上表皮细胞融合生长,透过细胞间隙可见其下的网状结构的脱细胞SIS。 3、于术后2、4、6周动态观察,实验组与对照组移植后均获得了满意的皮片成活率,两组移植皮片在各时间点的成活率对比无统计学意义。术后4周及6周,与单纯自体刃厚皮移植对照组比较,复合皮组植皮区收缩率均明显减少,有统计学意义(P<0.05)。复合皮组HE染色和Masson染色组织学观察可见,术后2周,表皮下的真皮组织与SIS染色程度不一,明显表现为两层结构,两者的胶原排列不同。脱细胞SIS内可见新生小血管长入,大量炎性细胞浸润,有成纤维细胞由创面迁入生长。术后4周,复合皮的表皮下仍然可见两种不同表现的胶原纤维结构,仍然有大量炎性细胞浸润,有大量成纤维细胞迁入,可见大量的新生血管。术后6周,复合皮下已经不能区分明显的真皮组织及脱细胞SIS两种胶原纤维结构,而是被同一性的胶原结构所取代;炎性细胞浸润明显减少,可见大量的新生血管及成纤维细胞。 结论:1、采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL联合脱细胞的方法处理制备脱细胞SIS,可以完全除去具有抗原成分的细胞;得到的脱细胞SIS无微生物污染;弹性好、有一定机械强度;具有高孔率的三维网状空间结构。成本低、来源广、容易制备。符合作为理想真皮替代物的一些基本条件。 2、人表皮细胞在脱细胞SIS上能黏附、生长,融合成片,证实脱细胞SIS无细胞毒性,具有良好的细胞相容性,可以在体外与人表皮细胞复合培养构建含双层结构的复合皮。 3、脱细胞SIS作为真皮替代物移植修复创面,成活率高,并可以改善创面愈合质量。


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