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促黄体素对人排卵前卵泡中缝隙连接和局部凋亡途径的影响

马黔红  
【摘要】: 背景与研究目的:颗粒细胞(granulosa cell,GC)是组成卵泡的主要体细胞成分,它在卵泡生长和发育中有重要的作用,与生殖细胞的生长、发育相互依赖、相互协助。一些研究者认为在体外授精.胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)中,黄素化GC中某些超微结构的特征和凋亡可以作为预测IVF结局的指标。但是到目前为止,对影响黄素化GC凋亡的因子尚不完全清楚。本研究以IVF中排卵前卵泡作为研究对象,研究不同浓度的促黄体素(luteinized hormone,LH)是否会对卵泡的卵泡液和黄素化颗粒细胞的凋亡相关因子及细胞间的缝隙连接蛋白的表达产生不同的影响,以期寻找能对IVF妊娠结局有较强预测性的一种或几种因子。 材料与方法本研究收集、分离了从体外受精-胚胎移植病人排卵前卵泡中获得的黄素化颗粒细胞,进行原代培养,3天后分别加入促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH) 3IU/ml(对照组)、LH 1IU/ml(LHI组)、LH 3IU/ml(LH2组)和LH 6IU/ml(LH3组),培养24小时,分别测定黄素化GC中凋亡效应子半胱氨酸蛋白酶caspase-3、caspase-7和缝隙连接蛋白Cx43的mRNA和蛋白质的表达。并且在IVF取卵时收集排卵前卵泡的卵泡液,测定卵泡液中可溶性Fas(sFas)、sFasL和LH的浓度,分析在妊娠组和未妊娠组中这三个指标之间的差别,以及sFas、sFasL和LH与妊娠的相关性,应用Logistic回归分析sFas、sFasL和LH之间的相关性。 结果: 1、黄素化颗粒细胞体外原代培养是一个很好的估计卵巢功能及卵细胞质量的系统。原代细胞培养的优势在于最大程度地保存了细胞的特性,使体外实验结果更符合于体内的情况。 2、在黄素化颗粒细胞中,加入FSH和不同浓度的LH后,高浓度的LH3组的Caspase-3的mRNA和蛋白质的相对表达量高于其余各组,其中mRNA的表达在各组中有统计学差异,而蛋白的表达无显著统计学差异;而且随着外源性给予的LH浓度的增加,Caspase-3的mRNA和蛋白质相对表达量也有逐渐升高的趋势。Caspase-7的mRNA和蛋白质的相对表达也随着外源性给予的LH的增加也逐渐增高,其中LH3组的表达最高,且在mRNA的表达中LH3组显著高于LH1组和LH2组:而蛋白质的表达中各组间都没有统计学差异。 4、FSH组、LH1组和LH2组之间Cx43的mRNA和蛋白质的相对表达量没有差异,但是LH3组明显下降,与FSH组、LH1组和LH2组分别相比较,其中mRNA的表达有统计学的显著性差异,蛋白质的表达无统计学差异。 5、在IVF中,妊娠组排卵前卵泡液中的LH和sFasL水平都明显高于未妊娠组,两组之间的sFas水平没有明显差异。 6、通过logistic回归分析,卵泡液中与妊娠有统计学相关的因素仅为LH,OR=4.117,虽然sFasL在妊娠组和未妊娠组中有显著性差异,但经过回归分析后,它和sFas一样,都与IVF中病人是否妊娠没有相关性。 7、应用Spearman相关分析,发现卵泡液中的LH和sFasL的水平呈明显正相关关系,而卵泡液中的sFas和LH之间并没有相关性。 结论: 1、低剂量的LH(1IU/ml和3IU/ml)可以对黄素化GC发挥类似FSH抗凋亡的作用,在低剂量的LH作用下,细胞中Caspase-3、Caspase-7和Cx43的mRNA和蛋白质的表达与FSH组中的表达无明显差异;但高剂量的LH(6IU/ml)会使凋亡相关因子表达增加,引起细胞凋亡,影响缝隙连接蛋白Cx43的表达,并且有可能通过异常表达的Cx43导致细胞间连接失耦联,影响卵泡中的正常信息传导,影响GC的存活,导致GC的凋亡增加,从而间接影响卵母细胞的发育、成熟。 2、IVF妊娠组中排卵前卵泡卵泡液中的LH和sFasL明显高于未妊娠组;但是经过相关性分析和logistic回归分析后,发现只有卵泡液中的LH水平与妊娠有明显相关性。LH可能是通过某些其他途径对卵泡液中sFasL产生影响,并且LH可能对IVF的结局有很高的预测价值。


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