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天然药物厚朴防龋作用的药效学研究

冯瑾  
【摘要】: 现代龋病学理论认为维持和调节口腔细菌的生态平衡是防治龋病的关键。现有的防龋措施存在着诸多不足,天然药物因来源丰富,取材方便,用法简单,疗效显著,毒副作用轻微而倍受关注。中药防病健齿的古方和理论为中药防龋研究奠定了基础。本课题组在国内外率先开展天然防龋药物的筛选和防龋机制的研究,已经建立了防龋多指标活性筛选体系和药效学研究实验方法。天然植物药厚朴具有很强的抗菌作用,能够明显抑制主要致龋菌变形链球菌的生长及其GTF酶活性,但目前有关厚朴的防龋研究不够系统深入,对其有效成分及其防龋机制还缺乏进一步的认识,因此,本研究将采用体外筛选实验对厚朴防龋有效成分进行追踪、分离,综合评估其防龋效能,同时采用防龋药物疗效判断的药效学实验方法,从口腔细菌生物膜和牙齿矿化两方面进行药效学评价,探讨厚朴防龋的药理作用机制。 方法:利用现代分离手段提取、分离厚朴化学组分,针对致龋菌的主要毒力因子进行防龋多指标活性筛选实验,追踪厚朴防龋有效成分,评估厚朴有效成分对口腔常驻菌生长、产酸、产胞外多糖的作用;通过对口腔细菌生物膜MBEC(minimum biofilm eradication concentration)、MBIC(minimum biofilm inhibition concentration)以及MBRC(minimum biofilm reduction concentration)的测定,研究和评估厚朴有效成分对生物膜的形成和清除作用;利用CLSM结合特异荧光染料标记口腔细菌生物膜中死菌和活菌的方法观察药物作用下细菌生物膜形态、结构的变化及对生物膜活性的影响;利用pH循环模型评价厚朴有效成分对牙体硬组织的作用。 结果:1.经分离得到厚朴的A、B、C、D四个化学组分,筛选出B组分为厚朴抗龋的活性成分,经鉴定B组分主要含厚朴酚及和厚朴酚。2.体外防龋多指标筛选实验发现B组分与厚朴酚、和厚朴酚具有相同的抑菌效果,在不影响实验菌株生长的浓度下厚朴酚及和厚朴酚能够有效抑制细菌产酸,但对细菌产胞外多糖及乳酸脱氢酶的活性没有明显的抑制作用。3.研究药物对细菌生物膜生长的作用,发现细菌在MBEC~(TM)-Device上可形成良好的生物膜,厚朴有效成分能够抑制口腔细菌生物膜的形成,并可破坏已经形成的生物膜;CLSM下观察药物作用后生物膜结构松散、管道不清,死菌增多,生物膜厚度降低。4.厚朴有效成分对牙齿硬组织脱矿没有明显的抑制或促进作用。 结论:通过对天然药物厚朴的分离提取,结合活性筛选实验,得到厚朴防龋的有效成分——厚朴酚及和厚朴酚,经药效学研究验证了其对口腔细菌生物膜的防龋效能,对厚朴防龋的药理作用机制有了全面的了解。


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