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和厚朴酚脂质体治疗卵巢癌的实验研究

刘屹  
【摘要】: 目的:卵巢癌是女性生殖系统恶性肿瘤中死亡率最高的肿瘤。近年来传统的手术治疗和放疗手段似乎已处于平台期,总的生存率没有明显的提高,寻找有效而毒性小的抗癌药物一直是临床化疗的迫切要求。 和厚朴酚(honokiol)是一种从中药厚朴中提取的小分子天然产物,在体内、体外的实验中能抑制多种肿瘤细胞的生长,具有抗增生、抗肿瘤作用,并影响多种酶的生物活性,是一种潜在的化疗药物。但由于和厚朴酚不溶于水,难于吸收,阻碍了它的进一步临床应用。脂质体作为新型药物载体,能包裹抗生素、抗真菌药、化疗药物、生物制剂等,能改变药物的水溶性、体内分布和体内代谢。本实验使用脂质体包裹和厚朴酚,制备和厚朴酚脂质体(honokiol encapsulated by pegylated liposomes,H-PEGL),观察其在体外和动物模型体内的抗卵巢癌活性,比较与化疗药物顺铂联合应用的疗效,并对和厚朴酚抗肿瘤的机制进行初步的探讨。 方法:1.通过薄膜—超声分散法制备纳米和厚朴酚脂质体,检测和厚朴酚纳米脂质体的理化特性。 2.通过MTT法分析和厚朴酚脂质体在体外对SKOV3肿瘤细胞增殖的影响。在荧光显微镜下观察和厚朴酚脂质体诱导细胞凋亡的形态学改变,并用流式细胞术检测其对肿瘤细胞凋亡和细胞周期的影响; 3.应用BALB/c裸鼠建立SKOV3人卵巢癌皮下瘤模型。用不同剂量的和厚朴酚脂质体治疗荷瘤裸鼠,观察疗效和筛选有效治疗剂量,同时观察和厚朴酚脂质体可能的不良反应。 4.应用BALB/c裸鼠建立SKOV3人卵巢癌腹腔移植瘤模型。荷瘤小鼠模型随机分为4个治疗组,即:和厚朴酚脂质体组;空白脂质体组;DDP组与NS对照组,观察和厚朴酚脂质体对裸鼠腹腔瘤生长抑制情况和腹水的生成。 5.分别用和厚朴酚脂质体、DDP单药、和厚朴酚脂质体和DDP联合治疗、NS和空白脂质体对照处理荷皮下瘤裸鼠,观察联合治疗对裸鼠肿瘤生长的抑制情况和不良反应。 6.通过CD31免疫组化检测肿瘤组织内微血管数量以及通过TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡的情况。 结果:1.和厚朴酚脂质体粒径大小为130±20nm,包封率为85%。将和厚朴酚脂质体用5%葡萄糖液溶解后放入4℃的冰箱中放置1月无沉淀析出。 2.MTT实验表明和厚朴酚脂质体呈时间和剂量依赖的抑制SKOV3细胞的增殖。荧光显微镜下,见和厚朴酚脂质体组凋亡细胞明显增加。流式细胞仪检测和厚朴酚脂质体诱导SKOV3肿瘤细胞的凋亡率是35.0±5.5%,和对照组(包括空白脂质体和PBS)相比差异有显著性(P<0.05)。 3.体内实验结果提示20mg/kg和厚朴酚脂质体剂量能较好地抑制肿瘤生长,和厚朴酚脂质体抑制肿瘤生长与剂量相关。 4.和厚朴酚脂质体能有效的抑制腹腔移植瘤鼠模型肿瘤生长。 5.动物实验表明和厚朴酚脂质体和DDP联合治疗导致更强的抗肿瘤效应,在联合治疗的28天后,对肿瘤生长的抑制就表现出协同效应(协同指数:1.48),并最终导致部分肿瘤消退。而且和厚朴酚脂质体和DDP联合治疗没有明显的不良反应。 6.免疫组化(CD31染色)证实和厚朴酚脂质体治疗组的肿瘤组织微血管密度明显低于DDP处理组(P<0.05)和对照组(包括生理盐水组和空白脂质体组)(P<0.01)。而凋亡细胞(TUNEL检测)明显高于NS组和空白脂质体组(P<0.05),和厚朴酚脂质体治疗组与单用顺铂治疗组肿瘤细胞凋亡百分率相比,经统计学处理差异无显著性(P>0.05)。和厚朴酚脂质体+DDP联合治疗对降低肿瘤组织的微血管数量和增加肿瘤组织凋亡细胞的作用较单独和厚朴酚脂质体或DDP处理更加显著(P<0.05),并具有协同效应。 结论:本研究采用脂质体包裹方法明显改善了和厚朴酚的水溶性。实验证实了和厚朴酚脂质体在体外具有抗肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡的作用,发现和厚朴酚脂质体在体内抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的效果与剂量相关。证实了和厚朴酚脂质体能有效的抑制腹腔移植瘤鼠模型肿瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和抑制肿瘤新生血管的形成有关。进一步实验证实和厚朴酚脂质体和DDP联合治疗能协同增加肿瘤细胞的凋亡和抑制肿瘤新生血管的形成,从而导致了更强的抗肿瘤效应。 本研究为和厚朴酚治疗肿瘤的下一步研究拓展了一个新的方向,为联合治疗卵巢癌提供了一种新的良好耐受的天然抗肿瘤药物选择,同时为和厚朴酚的临床应用打下基础。


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