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肿瘤多药耐药基因表达与逆转的实验研究及应用

周琦  
【摘要】: 肿瘤多药耐药是造成肿瘤化学治疗失败的最主要原因。本文通过实验方法研究设计和临床应用,探讨肿瘤多药耐药基因(MDR-1)的异常表达检测方法及其临床意义。采用逆转录―多聚酶链反应双酶单管PT-PCR法,建立了检测肿瘤细胞MDR-1基因表达的方法。所建立的检测实体瘤MDR-1基因表达的方法,检测用标本量小、特异性强、敏感性高,同时可避免同位素污染,具有省时、省事、高效、敏感、特异的优点,在临床上有广阔的应用前景。从实验结果及分析可知,MDR-1是肿瘤组织标本中可以检测的客观指标,并且在一些恶性肿瘤组织中呈高表达。在实验用恶性肿瘤组织中,MDR-1呈不同程度的高表达,乳腺癌中MDR-1阳性率最高,大肠癌次之,其次为卵巢癌、食管癌,MDR-1在不同肿瘤中表达阳性率可相差3倍。 用肿瘤多药耐药细胞株KBV200为细胞模型,实验研究中药逆转剂、多药耐药基因反义链、细胞分化剂及加温处理的逆转效果。探讨了多种中药、反义技术、加温及细胞分化剂逆转多药耐药作用与诱导细胞凋亡的关系。实验结果表明,TTD、RTD、CDA-II、加温有明显逆转作用;LTZ、MDR-1反义核酸有一定逆转作用;TTD与MDR-1反义核酸、CDA-II、加温有协同逆转作用;CDA-II与加温有协同逆转作用;加温、CDA-II可诱导KBV200发生凋亡。 通过对53例卵巢癌患者的MDR-1表达情况,及其化疗疗效和生存率进行观察随访研究,探讨了MDR-1基因表达在临床应用的地位。研究发现:MDR-1阴性或阳性表达与化疗疗效存在明显的相关性,即化疗可诱导产生耐药,诱导生成MDR-1。临床可通过MDR-1检测及逆转方法研究以指导其用药,减少耐药发生。对卵巢癌合并腹水病例,应用细胞分化剂CDA-II的初步临床观察显示,在术前化疗的同时,给予CDA-II合并治疗,可以降低恶性肿瘤MDR-1表达,利于腹水控制和肿瘤缩小。CDA-II是通过改变肿瘤细胞甲基化状态,从而诱导其凋亡并逆转耐药,增加化疗敏感性,提高疗效。


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