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贯叶连翘中有效成分的分离纯化工艺及其检测方法的研究

史丰华  
【摘要】:贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)提取物及其制剂是北美和欧洲最畅销的抗抑郁植物药,大量临床前和临床研究己经证实其对中,轻度抑郁症有效,且副作用较传统的化学抗抑郁药轻微。新的研究表明,其有效成分具有抗病毒,抗癌抗肿瘤以及治疗肝炎,白血病等多种药理作用。 为了更好的开发利用贯叶连翘这一中药资源,本文综合运用了多种定性与定量分析测定技术,中药提取分离纯化技术以及现代色谱技术,研究了贯叶连翘活性成分金丝桃素和黄酮类物质的提取分离纯化工艺,及相关质量分析方法,建立了简单,稳定的制备工艺,并获得了富含金丝桃素和富含黄酮类物质的两种产品,金丝桃素含量和黄酮含量分别达到UV40%和80%,同时还制备了HPLC 含量达到89%的金丝桃素产品。 论文主要做了以下工作: (1)叶连翘中活性成分的提取。论文主要采用单因素考察法对金丝桃素和黄酮类的提取工艺条件进行了研究,考察了提取溶剂的用量,提取时间以及提取温度对提取效果的影响,最终确定提取的工艺条件为:35 倍量的80%乙醇溶液,40℃下超声提取1.5h,金丝桃素和黄酮类的提取率分别达到93%和88%。 (2)贯叶连翘中活性成分的分离纯化。论文主要采用大孔树脂的方法对贯叶连翘中金丝桃素类和黄酮类进行了分离,纯化。选用具有较大吸附量和较好解吸效果的HPD-100 树脂作为金丝桃素类和黄酮类初步分离树脂。采用40%和60%乙醇溶液分别洗脱金丝桃素成分和黄酮类成分的梯度洗脱方式,在同一种树脂上连续获得富含金丝桃素和富含黄酮类的两种洗脱液。两种洗脱液经HPD-100 和D-101树脂的进一步分离纯化后,得到金丝桃素含量为40%和黄酮类含量为80%的两种产品。 (3)金丝桃素HPLC 分析和制备方法的研究。论文建立了金丝桃素成分的HPLC定量分析方法,色谱条件是:流动相为:甲醇-乙酸乙酯-0.1M 磷酸二氢纳(514:208:278 )流速:1.0Ml/min,检测波长:590nm,柱温:室温。并在此基础上摸索出金丝桃素的HPLC 制备方法,制备色谱条件是:流动相,甲醇-乙酸乙酯-0.1M 磷酸二氢纳(615:235:150);流速,3ml/min;每次进样2ml;检测波长,590nm。制备出含量为89%的高纯度的金丝桃素产品,可以作为一般分析的对照品使用。


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