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三七茎叶中黄酮类化合物初步研究

张志信  
【摘要】:阐述了黄酮类化合物的药理作用、提取、含量测定、分离及结构鉴定的方法,介绍了中药三七中的化学成分及其研究进展,对三七茎叶中的黄酮类化合物进行了系统的研究。 (1)用乙醇作溶剂,用索氏提取器进行提取,采用硝酸铝—亚硝酸钠比色法测定总黄酮含量,以总黄酮的提取率为指标,确定了三七茎叶中黄酮类化合物的最佳醇提工艺条件即:用70%乙醇溶剂提取4h 总黄酮提取率最高,三七叶中的黄酮含量为13.55 mg/g DW,茎中的含量为7.28 mg/g DW,茎和叶所含的黄酮类物质的成分有差异。通过硝酸铝—亚硝酸钠显色稳定性试验,确定显色后15~40 分钟之间是三七叶片总黄酮含量测定的最佳时段。此外,本实验还对三七茎叶黄酮提取液进行了各种定性颜色反应,初步确定其中的黄酮类物质主要为黄酮醇及其甙类。 (2)采用正交试验方法,确定了碱水法和微波—碱水法提取三七茎叶总黄酮的最佳工艺即:碱水法的提取工艺为:用pH=10 的稀碱液作溶剂,液料比30 :1,浸提温度80℃,提取2 次,每次40 分钟。微波-碱水法提取三七茎叶总黄酮的最佳工艺为:pH 为8,微波功率为中档,料液比为1g :40ml, 微波作用时间为10min。提取2 次。由于微波-碱水法用于三七叶总黄酮的提取具有省时、高效、节能的优点,提取率高于醇提法和碱水法,所以本文采用该法作为最佳提取方法。 (3)首先用壳聚糖对三七茎叶的水提取液进行澄清处理,其最佳工艺为:壳聚糖配制的澄清剂的添加量为提取液体积的0.9%,静置2 小时,pH 值调节为6,温度为室温。然后用AB-8 树脂进行纯化,其工艺参数为:70%乙醇水溶液作洗脱剂,洗脱速度为2BV/h,洗脱剂用量为5 倍量树脂体积。 (4)总黄酮用聚酰胺柱进行分离,得到三个三七茎叶黄酮组分,经过硅胶薄层色谱、显色法及紫外光谱的鉴定,结合相关的文献分析,初步确定三七茎叶中所含的黄酮类化合物分别是槲皮素、槲皮素—3—O—糖甙和山奈酚—3—O—糖甙。 (5)三七茎叶总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721 增殖有抑制作用,改变SMMC-7721 细胞的周期分布,即G1 期细胞百分率有所下降,S 期百分率增加,这种作用呈剂量依赖性。


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