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天麻育种材料创新研究与评价

李德柱  
【摘要】:在我国天麻已有2000多年的药用历史,其安全性和有效性经大量的临床应用后得到充分证明。现代研究表明,天麻对中枢神经系统、心血管系统和免疫系统有有效作用,主要含有酚类及其苷类、有机酸类、多糖类等有效组分。本论文以川天麻南乌一号(TMNW-1)和川天麻阿红一号(TMAH-1)两种育种新材料为主要实验材料,川天麻其它产地不同种质资源为对比材料,参考《中国药典》(2015版,一部)项下的天麻质量标准及国内外文献资料,测定其水分、灰分、浸出物、多糖、天麻素和对羟基苯甲醇含量,并根据检测指标结果进行质量综合评价。在响应面法优化抗氧化成分回流提取工艺的基础上应用水杨酸法、FRAP法和DNA氧化损伤保护作用研究了天麻体外抗氧化活性和建立了不同产地川天麻不同种质资源HPLC指纹图谱。将指纹图谱与抗氧化活性测定结果相结合研究其体外抗氧化活性的谱效关系。建立了九寨沟(含两个新材料)、金口河、江油三个产地25批样品的定性和定量分析模型。草拟了两种川天麻新材料的质量标准及质量控制技术体系。主要研究结果如下:1、采用烘干法测定水分含量,测得两种新材料和对照样品的水分含量为7.15~9.94%,平均含量为8.41%;依据《中国药典》(2015版,一部)通则2302测得总灰分含量为2.10~3.80%,平均含量为2.92%,酸不溶性灰分含量范围为0.16%~0.46%,平均含量为0.31%;醇浸出物和水浸出物含量分别为12.87~26.62%、21.73~49.59%,平均含量分别为20.53%、34.46%;采用硫酸-蒽酮法测定多糖含量,含量在10.75%~29.2%之间;天麻素和对羟基苯甲醇含量之和为0.2953~0.7017%,平均值为0.4199%。质量综合评价川天麻南乌1号(TMNW-1)综合得分第一,川天麻阿红1号(TMAH-1)综合得分第三。2、采用响应面优化法优化天麻抗氧化成分回流提取工艺,最佳工艺为:料液比1:55,提取温度65℃,提取时间66 min。3、羟基自由基清除率测定结果为:新材料TMNW-1号羟基自由基清除率的IC50值最高,TMGH最小,其次为新材料TMAH-1号;总抗氧化能力测定结果表明两种新材料总抗氧化能力不佳;两种新材料具有一定抑制DNA氧化损伤作用,但在所有待测样品中表现不太好。4、建立了两种新材料等10批样品的HPLC指纹图谱,共标定15个共有峰。相似度范围为:0.923~0.997。相似度和聚类分析结果一致,10批样品分为两大类。5、将指纹图谱与抗氧化活性测定结果相结合,进行天麻抗氧化活性的谱效关系研究。结果显示,跟羟基自由基清除率有关的抗氧化峰有6个,跟总抗氧化能力有关的抗氧化峰有7个。6、运用判别分析(DA)成功的进行了两个新材料等25批天麻样品的产地鉴别研究,正确率100%;建立了天麻素和对羟基苯甲醇总含量的红外预测模型。7、初步草拟了川天麻南乌1号(TMNW-1)和川天麻阿红1号(TMAH-1)育种新材料的质量标准(草案)及质量控制技术体系。本论文通过对两种新材料和不同产地川天麻不同种质资源的品质和抗氧化活性的研究,指纹图谱、天麻素和对羟基苯甲醇总含量红外模型的建立,为两种新材料及其它天麻样品的质量控制和应用开发提供了科学依据。


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