收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

根癌农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转入甘蓝型油菜

陆万香  
【摘要】: 甘蓝型油菜是世界重要的经济作物之一,但是由于长期受到多种病害特别 是菌核病的危害,其产量和品质受到严重影响。目前,通过常规育种方式来寻 找合适的抗源尚存在困难。因此,利用植物基因工程,转入外源抗真菌基因使 油菜获得对菌核病的抗性无疑成为油菜抗病育种的一条可行的新途径。 本实验是在建立甘蓝型油菜下胚轴高频再生体系和成熟的遗传转化体系 的基础上,利用根癌农杆菌介导的方法,将玉米几丁质酶基因、大麦β-1,3 葡聚糖酶基因及其双价表达载体分别导入油菜,并对转基因植株进行了检测。 实验结果如下: 1.建立起以高频再生体系 取6d苗龄的下胚轴切段,接入MS+0.2mg/L BA+1.0mg/L2,4-D中预培养 3~4d,再转入MS+3.0mg/L BA+0.1mg/L NAA+6mg/L AgNO_3分化培养,50d后 下胚轴再生出不定芽。D_2和96V44两个品种再生频率达80%以上。 2.建立起以下胚轴为受体的遗传转化体系 取各转化受体接入预培养基上培养3d,然后采用OD_(600)值为0.3~0.4的农 杆菌菌液迅速浸染30sec,取出外植体,置灭菌滤纸上吸干多余的菌液,转入 表面附加有一层滤纸的预培养基上26℃、暗处共培养2d。完成共培养后,将外 植体转入MS+500mg/LCef液体培养基中,轻微振荡洗涤2~3次后滤纸吸干, 接入脱菌培养基中培养7d。然后依次转入分别附加5、10、15mg/L Kan的筛选 培养基中进行梯度筛选,将最终筛选到的绿芽进行检测和扩繁。四个品种的下 胚轴转化率在1.6~8.4%之间。 3.转基因植株的检测 分别对几丁质酶基因、葡聚糖酶基因和双价表达载体的Kan抗性芽进行 PCR分子生物学检测,结果表明目的基因已随NPTⅡ基因转入油菜。 分别取几丁质酶基因和双价表达载体转化植株的叶片制备粗酶液,通过化 学检测法和几丁质平板检测法显示:转基因植株叶片中几丁质酶的产量比对照 (非转基因植株)高,说明外源基因已在转基因植株中进行表达。 取几丁质酶基因转化植株的两个株系进行室内菌核菌的接种实验,结果表 明:其中一个株系与对照相比具有较强的抗性,适宜于进一步田间鉴定,以筛 选出有前途的抗菌核病的油菜新材料。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;科技动态[J];江西农业科技;1980年12期
2 焦东升;伊犂黑蜂的初步考察[J];新疆农业科技;1980年07期
3 黄祥辉,颜季琼;应用荧光增白剂VBL研究原生质体细胞壁的再生[J];植物生理与分子生物学学报;1980年02期
4 ;蚕桑一百个为什么[J];蚕桑通报;1980年03期
5 ;灭幼脲防治二代粘虫效果好[J];河南农业科学;1980年02期
6 ;国外农业科技[J];农业科技通讯;1980年04期
7 石毓亮;;夜蛾雌成虫生殖系统研究(二)——六种粘虫雌成虫生殖系统构造[J];山东农业大学学报(自然科学版);1980年02期
8 孙继文;大豆拌根瘤菌成本低产量高[J];新农业;1981年01期
9 沈李冰;文摘[J];中国油料作物学报;1981年04期
10 马庆生 ,黄斌;约翰·英纳斯研究所[J];世界农业;1981年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵维信;李胜;;克氏原螯虾大颚器的结构与功能研究[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
2 孙长颢;刘志芳;王舒然;李虎山;;几丁聚糖对大鼠体重的影响及其与体内瘦素和睾酮关系的研究[A];中国营养学会第五次营养资源与保健食品学术会议论文摘要汇编[C];1999年
3 毛天球;王常勇;张森林;陈富林;马秦;韩亮;王会信;赵明;;基因重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)复合人工骨修复面颅骨缺损实验研究[A];第二届中国国际暨第五届全国口腔颌面外科学术会议论文集[C];1998年
4 余迪求;许耀;李宝健;;根癌农杆菌转化谷子培养细胞早期过程的细胞生物学研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
5 袁朝兴;白永延;;亚麻原生质体及其外植体转化系统的建立[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
6 钱旭红;;苯甲酰脲及二芳酰基肼类昆虫生长调节剂的构效关系与作用机制的分子模型法研究[A];中国化工学会农药专业委员会第八届年会论文集[C];1996年
7 张立新;李宗成;;新型苯甲酰脲类化合物的合成及生物活性的研究[A];中国化工学会农药专业委员会第八届年会论文集[C];1996年
8 张荣;钱旭红;倪长春;;2-酰胺基-5-芳基-1,3,4-噁唑化合物的合成及杀虫、抗菌活性[A];中国化工学会农药专业委员会第八届年会论文集[C];1996年
9 彭辉银;张双民;吴东;王华林;陈新文;胡志红;;几丁质酶在农林病虫害生物防治的应用及研究进展[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
10 刘梅;徐同;;木霉的营养生长及发酵条件[A];中国植病学会西南联合学术年会论文集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋建雄;苎麻的分子育种研究[D];湖南农业大学;2000年
2 黎定军;辣椒高效离体再生与遗传转化体系建立及抗病转基因研究[D];湖南农业大学;2000年
3 檀建新;Bt cry基因克隆和环状芽孢杆菌几丁质酶的研究[D];中国农业科学院;2000年
4 刘伟华;几丁质酶(Chitinase)基因转化小麦的研究[D];东北农业大学;2000年
5 赵东;茶树多酚氧化酶基因的克隆和转化系统研究[D];浙江大学;2001年
6 郭兴启;翻译与非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白基因介导的抗病性比较[D];浙江大学;2001年
7 彭志强;霍乱肠毒素B亚单位在转基因番茄植物中表达的研究[D];第一军医大学;2001年
8 杨广东;基因工程改良几种重要蔬菜的抗虫性[D];浙江大学;2002年
9 李海燕;丛枝菌根(AM)真菌诱导植物抗/耐线虫病害机制的研究[D];山东农业大学;2002年
10 何迎春;外源几丁质酶基因转化水稻的研究[D];湖南农业大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 斯琴巴拉;豇豆几丁质酶的基因克隆、序列分析及其植物表达载体的构建[D];南京农业大学;2000年
2 李惠霞;β-氨基丁酸诱导辣椒对疫病抗性及其作用机理的研究[D];甘肃农业大学;2000年
3 李群;根癌农杆菌介导的β-1,3-葡聚糖酶基因在新疆甜瓜中的转化与表达[D];新疆农业大学;2000年
4 刘家忠;干旱预处理诱导的玉米幼苗的交叉适应及其机制[D];云南师范大学;2000年
5 韩继刚;小球藻病毒的分离提纯及其几丁质酶基因的克隆[D];河北大学;2000年
6 石磊;几丁质.几丁聚糖对运动小鼠某些生化指标的影响[D];陕西师范大学;2000年
7 高燕会;农杆菌介导的几丁质酶基因及双价抗虫基因对小麦和棉花遗传转化的研究[D];山西农业大学;2001年
8 武家才;棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒p40、chi基因克隆及chi基因在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达[D];浙江大学;2001年
9 姜瑛;苋菜凝集素基因(ACA)转入甜瓜及其在转基因植物中的表达[D];东北农业大学;2001年
10 戴大鹏;白菜类蔬菜转基因技术研究:农杆菌介导的离体转化和植株渗入转化[D];首都师范大学;2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 史华 余仁;甲壳素——生命的要素[N];中国水利报;2000年
2 玉才;养蛆——二十一世纪新兴的饲养业[N];北京科技报;2001年
3 记者 林岳夫;海洋微生物几丁质酶研究取得进展[N];中国海洋报;2001年
4 张德晨 张立军;蚕蛹的综合开发利用[N];中国畜牧水产报;2001年
5 刘福民;养殖蝇蛆可助致富[N];广东科技报;2001年
6 刘福民;养殖蝇蛆前景好[N];湖北科技报;2001年
7 郑延平;春夏慎用矿物质饲料[N];江苏农业科技报;2001年
8 本报记者 唐先武;酸碱失衡:健康新杀手[N];科技日报;2001年
9 山东省东平县畜牧局 郑延平;春夏哪些矿物质饲料禁用[N];山西科技报;2001年
10 方华 舒阳;脂质活性物:灵芝孢子保健抗病的主要成分[N];中国医药报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978