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家蚕AFLP分子标记连锁图的构建

孙德斌  
【摘要】: 家蚕是一种重要的经济昆虫,在我国的国民经济中具有非常重要的地位,家蚕分子 连锁图谱的构建对促进家蚕分子生物学的研究具有重要意义。 扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)标记技术 是一种新型的分子标记技术,兼具RAPD标记的多态性检测率高和RFLP标记稳定性好 的特点,目前已广泛应用于多种生物的连锁图谱的构建和数量性状位点(Quantitative Trait Locus, QTL)定位,具有良好的应用前景。 本文使用AFLP标记技术构建了一张高密度的家蚕遗传图谱。主要结果如下: (1)24组AFLP引物,共扩增出652个多态性位点,每组引物扩增出27.2条多 态性带。本实验中可检测的片段大小在100-1000之间。 (2)297个有效位点中的197个构成了33个连锁群,占有效位点的66.33%, 占总多态性位点的30.22%,还有100个位点不连锁,不能进入连锁图中,。 (3)33个连锁群中,最大的连锁群为第4连锁群,共有46个标记,最小的连锁 群只有2个标记;最长的连锁群为890cM,最小的连锁群为1.1cM,位点间的最大图距 为53.8cM,最小图距为0.55cM。 (4)33个连锁群覆盖基因组的总长度为2692.4cM,每条连锁群的平均长度为 81.6cM,家蚕有28条染色体,本实验所构建的连锁群总数为33个,说明我们所构建的 连锁群中有些是相互连锁的,只是目前还缺乏特定的标记将其整合在一起。 (5)在33个连锁群中平均图距小于10cM的连锁群有23个,图距在10-20cM之 间的连锁群有8个,大于20cM的连锁群有2个,位点间的平均距离为9.1cM,每个连锁 群上的位点数平均为6个。 (6)在197个构成连锁群的位点中,有91个位点间的图距小于10cM,占连锁位点的 16.2%;有64个位点间的距离小于20cM大于10cM,二者共占197个位点的78.7%。 (7)分析表明,连锁群的长度与标记数目呈正相关,即当一个连锁群上的标记数 目较多时,其长度也相应地增长;同时标记中有部分成簇的现象,估计是因为位点之间 联系较紧密, 在育种过程中,借助高密度的分于连锁图,根据实际需要,追踪分子标记并结合其 控制的表型性状进行选择,减少盲目性,达到提高育种效率的目的,加快育种进程。目 前,分子标记育种在动植物中应用己得到了广泛重视,在西瓜、油菜等物种中己建立了 分于标记辅助选择(MAS)的模型。家蚕中己定位的质量性状基因和数量性状基囚都较 少,家蚕已构建的连锁图谱的密度也较低,主要是框架图的建立,本文所构建的是一张 密度较高的分于连锁图,为后一步的 QTL基因定位和分子标记辅助选择(MAS)奠定 基础。


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