家蚕AFLP分子标记连锁图的构建

【摘要】： 家蚕是一种重要的经济昆虫，在我国的国民经济中具有非常重要的地位，家蚕分子 连锁图谱的构建对促进家蚕分子生物学的研究具有重要意义。 扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）标记技术 是一种新型的分子标记技术，兼具RAPD标记的多态性检测率高和RFLP标记稳定性好 的特点，目前已广泛应用于多种生物的连锁图谱的构建和数量性状位点（Quantitative Trait Locus， QTL）定位，具有良好的应用前景。 本文使用AFLP标记技术构建了一张高密度的家蚕遗传图谱。主要结果如下： （1）24组AFLP引物，共扩增出652个多态性位点，每组引物扩增出27.2条多 态性带。本实验中可检测的片段大小在100-1000之间。 （2）297个有效位点中的197个构成了33个连锁群，占有效位点的66.33％， 占总多态性位点的30.22％，还有100个位点不连锁，不能进入连锁图中，。 （3）33个连锁群中，最大的连锁群为第4连锁群，共有46个标记，最小的连锁 群只有2个标记；最长的连锁群为890cM，最小的连锁群为1.1cM，位点间的最大图距 为53.8cM，最小图距为0.55cM。 （4）33个连锁群覆盖基因组的总长度为2692.4cM，每条连锁群的平均长度为 81.6cM，家蚕有28条染色体，本实验所构建的连锁群总数为33个，说明我们所构建的 连锁群中有些是相互连锁的，只是目前还缺乏特定的标记将其整合在一起。 （5）在33个连锁群中平均图距小于10cM的连锁群有23个，图距在10-20cM之 间的连锁群有8个，大于20cM的连锁群有2个，位点间的平均距离为9.1cM，每个连锁 群上的位点数平均为6个。 （6）在197个构成连锁群的位点中，有91个位点间的图距小于10cM，占连锁位点的 16.2％；有64个位点间的距离小于20cM大于10cM，二者共占197个位点的78.7％。 （7）分析表明，连锁群的长度与标记数目呈正相关，即当一个连锁群上的标记数 目较多时，其长度也相应地增长；同时标记中有部分成簇的现象，估计是因为位点之间 联系较紧密， 在育种过程中，借助高密度的分于连锁图，根据实际需要，追踪分子标记并结合其 控制的表型性状进行选择，减少盲目性，达到提高育种效率的目的，加快育种进程。目 前，分子标记育种在动植物中应用己得到了广泛重视，在西瓜、油菜等物种中己建立了 分于标记辅助选择（MAS）的模型。家蚕中己定位的质量性状基因和数量性状基囚都较 少，家蚕已构建的连锁图谱的密度也较低，主要是框架图的建立，本文所构建的是一张 密度较高的分于连锁图，为后一步的 QTL基因定位和分子标记辅助选择（MAS）奠定 基础。