收藏本站
收藏 | 论文排版

半夏离体培养研究及遗传转化的初探

贾永芳  
【摘要】: 单子叶植物三叶半夏是天南星科半夏属草本植物,为我国常用的中药材,已有2000多年的用药史。由于三叶半夏自身繁殖系数低,目前药用和出口需要量增大,其野生资源日益枯竭。人工栽培三叶半夏也有30年的历史,但是三叶半夏的生长受周围环境的影响较大,加上各种病害及栽培成本的影响,给人工栽培半夏造成很大的限制。因此通过组织培养对其快速繁殖,以期为其工厂化生产种苗或生产有用的药效成分提供资料。同时,遗传转化的研究为以后提高半夏抗逆性和有效成分含量打下了基础。 本研究建立了三叶半夏的高频再生体系,并对其细胞悬浮培养条件的优化进行了较详细的研究。在此基础上,我们对根癌农杆菌介导的三叶半夏的遗传转化体系进行了初步的探索。主要实验结果如下: 1.三叶半夏叶盘和叶柄高频再生体系的建立 取三叶半夏刚展开的叶片及叶柄,常规消毒后接入含2,4-D/KT,2,4-D/BA,NAA/BA不同浓度组合的MS诱导培养基,15d后伤口处长出愈伤组织,将愈伤接至含不同NAA/BA,NAA/KT浓度组合的MS培养基中,一个月后得到再生小植株。在此实验中得到的最佳诱导培养基是MS+2.0mg/L2,4-D+0.5mg/LKT(简称MS1),诱导频率80%以上;最佳分化培养基是MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/LBA(简称MS2),不定芽分化率达100%。 2.组培与野生半夏成分分析 组织培养和野生的块茎分别用80%甲醇、0.2mol/L硫酸、蒸馏水提取内含物,经HPLC分析,比较其图谱表明,组织培养块茎中各成分的总含量高于野生块茎,二者的主成分构成相似。 3.细胞悬浮系的建立 取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮振荡培养。经3~4次继代培养得到分散性好的细胞悬浮系。悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养12~16d达到对数生长期,细 西南农业大学二 00三届硕士学往论丈 摘 要 胞鲜重在第 18d达到最大值。悬浮液 PH值的变化在对数生长期同生长曲线一致。细 胞悬浮液过滤得到的小细胞团接种于MSZ分化培养基上,40d后分化出了小植株。 4.叶柄、愈伤组织为受体的遗传转化体系的初探 取三叶半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织或常规消毒后的外植体叶柄,在OD值为0.2 的农秆菌液中感染15min,吸干多余菌液,接入MS培养基中,暗处共培养3d,共培 养后用含 500mg/I.cef的无菌水震荡脱菌 Zh,再转入 MSI巧 培养基上进行诱导筛选,最后将长出的抗性愈伤进行鉴定,GUS基因己经稳定表达。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 赵喜进;赵帅;;旱半夏市场前景分析[J];农村新技术;2011年20期
2 张袖丽,谢中稳,陶汉之;半夏属植物同工酶的电泳分析[J];安徽农业大学学报(自然科学版);1997年03期
3 颜丙芹;;优质半夏的加工技巧[J];农产品加工;2010年03期
4 高凯,李名旺,顾德兴;华东地区半夏属群体营养器官的比较解剖及其演化[J];南京农业大学学报;1998年02期
5 民强;;半夏时节话半夏[J];中国花卉盆景;1989年06期
6 侯典云;王聪睿;王荔;马占强;;昭通半夏染色体观察[J];安徽农业科学;2006年07期
7 侯典云;王聪睿;王荔;马占强;;昭通半夏染色体观察[J];江西农业大学学报;2006年02期
8 陈士亮;;旱半夏立体种植丰产技术[J];河南农业;2006年03期
9 冯效飞;;半夏特征特性及栽培技术[J];现代化农业;2009年11期
10 周水根;;优质旱半夏种植技术[J];农家科技;2010年01期
11 尹平孙;;旱半夏高产五措施[J];农技服务;2006年01期
12 尹平孙;;果林套种旱半夏可增收[J];新农村;2007年12期
13 胡斌;;清水县半夏规范化栽培技术推广措施[J];种子世界;2009年01期
14 程莉华;徐康康;;半夏人工栽培技术[J];云南中医中药杂志;2009年08期
15 尹平孙;;果林套种旱半夏高产技术[J];农村新技术;2009年19期
16 林先明;张军;谢玲玲;郭杰;刘海华;刘政华;唐春梓;甘国菊;;半夏新品种鄂半夏2号的选育[J];湖北农业科学;2010年11期
17 侯典云;徐虹;施江;胥华伟;杨艳琼;王荔;;组培半夏适宜采收期研究[J];江苏农业科学;2011年03期
18 侯典云;王荔;;半夏研究进展[J];现代农业科技(上半月刊);2006年02期
19 尹平孙;;果林套种旱半夏效益好[J];农业知识;2007年07期
20 肖顺经;马跃新;曾庆艳;;昭通半夏的质量亟待重视[J];现代中药研究与实践;2009年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张爱民;薛建平;卢河东;朱艳芳;常莉;;半夏的研究进展[A];第九届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2010年
2 张爱民;卢河东;朱艳芳;常莉;薛建平;;半夏的研究进展[A];2010全国知名中医院院长暨道家文化与中医药养生论坛论文集[C];2010年
3 吴林;薛建平;;半夏组织细胞培养的研究概况[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
4 陶文婷;郁红礼;吴皓;吴皓;朱法根;邱韵萦;赵腾斐;;半夏醇制减毒新方法研究(Ⅰ)——新方法及新工艺研究探讨[A];中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集[C];2011年
5 刘鑫欣;崔晓星;刘金欣;孟繁蕴;魏英勤;;半夏胚性悬浮细胞系的建立[A];全国第9届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2010年
6 兰才武;郑建立;杨光明;邓忠;焦洪海;贺定翔;;贵州省赫章县及邻近地区半夏在赫章平山乡的生态及经济适应性研究[A];全国第9届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2010年
7 郭巧生;张君毅;卫新荣;蒋传中;;半夏不同居群主要经济性状比较研究[A];2006海峡两岸暨CSNR全国第七届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2006年
8 于素玲;李敏;何俊蓉;杨小多;周睿;卿艳;;不同基质和栽培方式对组培半夏移栽成活及生长发育的影响[A];中华中医药学会第十届中药鉴定学术会议暨WHO中药材鉴定方法和技术研讨会论文集[C];2010年
9 于素玲;李敏;何俊蓉;杨小多;周睿;卿艳;;不同基质和栽培方式对组培半夏移栽成活及生长发育的影响[A];第二届全国中药商品学术大会论文集[C];2010年
10 郭巧生;贺善安;;半夏不同居群花粉粒形态观测[A];中国自然资源学会全国第三届天然药物资源学术研讨会论文集[C];1998年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 耿慧云;半夏对遮阴和高温响应机理的研究[D];山东农业大学;2012年
2 杨旻;基于ISSR和SRAP的半夏种质资源遗传多样性研究[D];湖北中医药大学;2010年
3 张君毅;半夏遗传多样性分子标记及质量评价研究[D];南京农业大学;2007年
4 罗焜;基于芸香科、天南星科的植物DNA条形码通用序列研究[D];湖北中医药大学;2010年
5 申浩;川半夏规范化种植技术和对不同温度的生理响应研究[D];四川农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于素玲;半夏组培快繁技术的优化及品质研究[D];成都中医药大学;2011年
2 周滢;可降解育苗盘及其在半夏组培苗栽培中的应用研究[D];浙江理工大学;2010年
3 黄旭;半夏软腐病菌的分离鉴定及致病性研究[D];华中农业大学;2012年
4 邢建永;半夏快繁体系的建立及次生代谢规律的初步研究[D];南京农业大学;2010年
5 郑丹书;半夏遗传多样性分子标记研究[D];华侨大学;2013年
6 冯瑞娟;半夏蛋白的提取分离、含量测定及对Hela细胞的作用研究[D];浙江理工大学;2012年
7 曹瑞霞;半夏再生体系的建立及其次生代谢的调控[D];西南大学;2013年
8 郑道光;桃叶型半夏多倍体生理特性研究[D];浙江理工大学;2011年
9 周炜;半夏蛋白纯化、表达及其活性研究[D];浙江理工大学;2014年
10 龙林;基于灰色关联度的半夏种质资源评价[D];华中农业大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 灵寿县中药材种植研究所 郑大香 张合支;种半夏 迭地备播走在前[N];河北科技报;2006年
2 赵喜进 赵帅;旱半夏:特效药材市场缺口大[N];江苏农业科技报;2006年
3 尹平孙;春种旱半夏[N];江苏农业科技报;2006年
4 孙广钦;半夏供不应求种植前景广阔[N];中国医药报;2007年
5 钟科;半夏[N];农民日报;2002年
6 孙广钦;半夏——未来几年药材种植的明珠[N];中国中医药报;2007年
7 吴立明 南阳张仲景国医学 院 程晓卫 南阳医学高等专科学校;南阳唐半夏本草考证及资源调查[N];中国中医药报;2006年
8 灵寿县中药材种植研究所 张合云 郑大香;棉花与半夏套种好处多[N];河北科技报;2007年
9 河北安国市中药材研究协会 赵喜进 赵帅;旱半夏货紧价扬 效益可观[N];江苏农业科技报;2006年
10 潘秀慧 吴棣飞;盾叶半夏有“芳踪”[N];温州日报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978