收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

植物(大葱)谷胱甘肽过氧化物酶分离纯化的探索

朱继玲  
【摘要】:谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,简称GSH-Px或GPX),是1957年由Mills在牛红细胞中发现的,近年来人们又在植物中检测到了该酶,它是一种含硒酶。在GSH作为氢供体的条件下,GSH-Px可清除有机氢过氧化物、细胞呼吸代谢产生的羟自由基和过氧化物,从而使细胞能维持正常的生理生化功能,故有防止畸变、预防衰老及参与前列腺素合成等重要病理或生理作用,并引起了人们的关注。已有不少从人、动物、微生物体中分离纯化出GSH-Px的报道,而从植物体中分离纯化GSH-Px的报道却极少。如果能从自然界丰富的植物资源中寻找到多种来源的GSH-Px,并分离纯化,将为该酶的开发研究和应用提供新的资源和途径。 采用测定GSH-Px的间接法Ⅱ检测了大葱、蒜、洋葱、姜、银杏老叶和新叶以及草珊瑚中的酶活性。其中大葱中GSH-Px活性最高,且大葱较易获得,不受季节限制,所以本实验选择了大葱作为GSH-Px分离纯化的材料。 大葱GSH-Px主要集中在40%~80%饱和度(NH_4)_2SO_4范围内盐析出来。GSH-Px比活力和提纯倍数随(NH_4)_2SO_4饱和度的增大而增加,在30%~50%饱和度范围内增加较快,在50%~80%饱和度范围内增加较为缓慢,在80%~100%饱和度范围内开始逐渐下降,但仍较大, 大葱粗提液经(NH_4)_2SO_4盐析和DEAE-Sepharose柱层析分离,得到了两种GSH-Px同工酶,即GSH-PxⅠ和GSH-PxⅡ。大葱粗提液比活力为15.42U/mg,经(NH_4)_2SO_4盐析后比活力为26.46U/mg,纯化倍数为1.72;GSH-PxⅠ经DEAE-Sepharose柱层析后比活力为42.12U/mg,纯化倍数为2.73;GSH-PxⅡ经DEAE-Sepharose柱层析后比活力为66.65U/mg,纯化倍数为4.32。 DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px温度曲线呈一钟罩形,符合酶促反应动力学曲线,最适温度范围为35℃~50℃。在20℃~45℃温度范围内,随着温度的升高,GSH-Px活力逐渐增大,因而反应速度也加快;当温度达到一定限度时(45℃以上),温度升高虽然能使酶促反应速度加快,但是,过高的温度也加速了GSH-Px的酶蛋白变性,酶失活。结果是随着温度的升高,反应速度反而下降,即50℃~60℃温度范围内,GSH-Px酶活力迅速降低。 DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px最适pH范围为pH7.0~pH7.6,pH低于6.4和pH高于8.0均会使酶分子结构发生变化,酶活性降低。 DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px较适宜的贮存温度为-40℃。在同一时段,随着贮存时间的延长,各种温度条件下酶活力都有下降,在室温和4℃下贮存,酶活性下降较多,特别是一周后酶活力就有显著的变化;而在-20℃和-40℃下贮存,酶活力虽然有所降低,但变化较小。 MgCl_2、IAc和对氯苯汞甲酸(PCMB)对DEAE-Sepharose柱层析后获得的大葱GSH-Px有明显的抑制作用,而KCl和CaCl_2对大葱GSH-Px无明显的作用,LiCl、ZnSO_4、BaCl_2和


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 许同和;略论海洋资源开发的走势[J];现代渔业信息;2001年12期
2 王燕平;;高校学籍管理探索[J];科技信息(科学教研);2007年26期
3 杨水彬;黄春保;王虹;兰智高;;地方师范院校综合化学实验的探索[J];实验室科学;2009年01期
4 陈艳霞;伍建林;盖立平;那杰;;医学物理学双语教学模式的探索[J];中国科技信息;2009年22期
5 李尚志,陈发来;《数学实验》课程建设的认识与实践[J];数学的实践与认识;2001年06期
6 邵国庆;矿产资源补偿费稽查技术初探[J];矿产保护与利用;2001年02期
7 钟国清;农业院校基础化学实验课程综合改革的实践与探索[J];实验技术与管理;2001年01期
8 肖蔚;化学教学中确立学生主体地位的探索[J];广西师范学院学报(自然科学版);2002年01期
9 耿道田,刘刚,施玉林,马军林,张晨新;微波暗室建设的探索与实践[J];实验室研究与探索;2002年S1期
10 徐彦辉;数学教学中培养学生探索能力的策略及启示[J];西北成人教育学报;2002年01期
11 任重,颉伟;科技型企业实施ISO9000标准实践探索[J];甘肃科技;2003年02期
12 夏石头,萧浪涛,曾可,王少先;开放研究型专业实验室管理的改革与探索[J];实验室研究与探索;2004年02期
13 陈红雨;;利用网络对公安民警实施继续教育的探索[J];黑龙江科技信息;2004年09期
14 郭凤林;;公允价值会计探讨[J];科技资讯;2006年02期
15 程慧琴;;高职数学教学探索[J];赤峰学院学报(自然科学版);2006年04期
16 马中秋;杨芳;;探索高职单片机实验课[J];科技信息(学术版);2006年08期
17 马中秋;杨芳;;探索高职单片机实验课[J];科技信息(学术版);2006年09期
18 申彤;;应用微生物学课程的教学探索[J];微生物学通报;2006年04期
19 宋奇飞;陈丹红;;五年制高职院校分层次教学探索[J];科技广场;2006年09期
20 黄志青;吴红;;服装设计专业实践教学探索[J];实验技术与管理;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张留保;真炳攸;徐根兴;赵富清;;免疫金银扫描电镜法观察血细胞膜的谷胱甘肽过氧化物酶及泛素肽的方法[A];第五次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1988年
2 王桂云;;社会主义新农村建设实践与探索[A];推动新型工业化 促进湖南经济发展——2007年湖南科技论坛(下)[C];2007年
3 刘乐斌;向桢;仇建国;梅劲健;;军队中心医院以科学发展观为指导推进全面建设的探索[A];中国成人医药教育论坛(2010)[C];2010年
4 张均东;孙培廷;;利用PowerPoint实现现代化教学的探索[A];大连海事大学校庆暨中国高等航海教育90周年论文集(机电分册)[C];1999年
5 孙喜惠;;高校图书馆读者服务工作探索[A];陕西省图书馆学会第五次会员代表大会暨学术研讨会与全国图书馆部室主任工作、学术研讨会论文集[C];2003年
6 朱张林;;应用多项技术系统改造A186型梳棉机的探索[A];“金轮杯”2009年全国纺纱梳理技术应用研讨会论文集[C];2009年
7 刘沫;陈海宁;陈晓猛;;创新人才培养的理论探索和实践[A];中国建设教育协会2002年立项研究课题论文集[C];2003年
8 赵明友;王玉云;;找准突破口和着力点,大力推进农业标准化——台州市农业标准化的实践与探索[A];2004年浙江省科协重点学术研讨项目(5)浙江省农业标准化建设对策研究论文集[C];2004年
9 陈建华;黄少烈;朱宝璋;游鹏程;;分子蒸馏技术在天然产物分离纯化上的应用进展[A];全国中药标准研究学术研讨会论文集[C];2005年
10 王念跃;赵伟;端木浩;李勇;黄宇峰;;人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陆志科;竹叶生物活性成分提取分离及其抗菌活性研究[D];中南林学院;2004年
2 徐金瑞;黑大豆种皮花色苷抗动脉粥样硬化及其抗氧化机制研究[D];西北农林科技大学;2006年
3 韩俊友;牛蛙皮肤抗菌肽分离纯化、基因克隆表达及生物学特性的研究[D];吉林大学;2007年
4 马春玲;海洋酵母普鲁兰类酵母碱性蛋白酶发酵生产、特性研究及基因克隆[D];中国海洋大学;2007年
5 陈杰;高密度培养盘基网柄菌及重组可溶性人Fas配体表达的研究[D];浙江大学;2008年
6 华颖;纤维蛋白溶解酶的发酵制备、分离纯化及酶学性质研究[D];江南大学;2008年
7 赵萍;家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂研究[D];西南大学;2008年
8 王元凤;茶多糖的分离纯化、结构及构效关系研究[D];江南大学;2005年
9 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
10 陶红;金线鱼胃蛋白酶纯化鉴定及结构研究[D];华南理工大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱继玲;植物(大葱)谷胱甘肽过氧化物酶分离纯化的探索[D];西南农业大学;2005年
2 刘妍;关于刘少奇探索国民经济调整问题的研究[D];黑龙江大学;2009年
3 乔少华;太子奶集团财务管理模式的探索[D];对外经济贸易大学;2006年
4 黄小华;中学语文教师专业化探索[D];江西师范大学;2005年
5 孟静;学校文化建设:现代学校发展的新趋向[D];山东师范大学;2006年
6 韩蕾;中国共产党对执政党执政规律的探索[D];吉林大学;2007年
7 李士龙;关于中小学校长后备培训转任制的探索[D];辽宁师范大学;2006年
8 高宏;利用网络对高中生进行德育教育初探[D];辽宁师范大学;2008年
9 韩铁辉;吉林经济发展战略的艰辛探索[D];长春理工大学;2006年
10 黄英;昆明市海口地区企业学校改制的思考与探索[D];云南师范大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 马浩剑李昕;王柯:五年做到国内第一[N];常州日报;2007年
2 林诚;卡那霉素分离纯化新技术通过鉴定[N];医药经济报;2002年
3 ;PCC分离纯化工艺进展速览[N];中国医药报;2006年
4 记者 王华锋;多数刺梨多糖组分具神经营养活性[N];中国医药报;2006年
5 王宏磊;中药苷类有效成分提取 辅料、工艺各不同[N];中国医药报;2006年
6 林喆罗艳 原忠;分子印迹技术用于中药分离有据可依[N];中国医药报;2007年
7 本报记者 何聪;丰原:经济环境求双赢[N];人民日报;2005年
8 金通证券 陈泳潮;科华生物 小盘成长 爆发填权[N];证券时报;2006年
9 本报记者 白毅;多种提取手段推动中药研发[N];中国医药报;2005年
10 曹建明;促红细胞生成素(EPO)[N];中国经营报;2000年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978