家蚕浓核病毒BmDNV-6的研究

【摘要】：浓核病毒(Densoviruses,DNVs)属于细小病毒科(family Parvoviridae),浓核病毒亚科(subfamily Densovirinae),下设3个属,即浓核病毒属(densovirus)、相同病毒属(Iteravirus)和短病毒属(Brevidensovirus)。它们能感染寄生鳞翅目(lepidoptera)、双翅目(diptera)、直翅目(orthoptera)和蜻蜓目(Odonate)等昆虫。家蚕浓核病毒(BmDNV)属相同病毒属。近三十年来,BmDNV已分离到十余株,由于家蚕浓核病毒核酸组成复杂,Bergoin等提出将家蚕浓核病毒分成5类,即BmDNV-1(伊那株)、BmDNV-2(山梨株)、BmDNV-3(中国株)、BmDNV-4(印度株)和BmDNV-5(信大株)。1999年从西南农业大学家蚕基因库的病蚕中分离到一种浓核病毒,经研究发现是一种新型家蚕浓核病毒,命名为BmDNV-6。本文对该病毒的分类、流行病学和分子生物学等进行了研究,取得了以下研究结果: 一、BmDNV-6的分离、鉴定 1.BmDNV-6的核酸特性 核酸大小 BmDNV-6经分离纯化,制备的病毒核酸琼脂糖电泳结果表明,BmDNV-6的核酸大小约为6.5kb,与BmDNV-1(5kb)和BmDNV-2(双组分DNA,6.6kb和6.1kb)的核酸大小不同,三种家蚕浓核病毒的核酸存在明显差异,是三种不同的家蚕浓核病毒(图1)。 核酸类型 BmDNV-6病毒核酸分别用DNase和RNase消化,电泳检测显示BmDNV-6的核酸能被DNase酶消化,但不能被RNase酶消化,表明BmDNV-6的核酸类型为DNA,即BmDNV-6为DNA病毒。 核酸的单、双链 低盐溶液制备的BmDNV-6核酸与1.8%甲醛液分别作用0h、24h后,其在260nm处的吸光度明显增加,表明BmDNV-6为单链DNA病毒。 2.BmDNV-6与BmDNV-1和BmDNV-2的血清学关系 BmDNV-1、BmDNV-2和BmDNV-6分别与BmDNV-1、BmDNV-2和IFV的抗体进行免疫斑点杂交,杂交结果显示出BmDNV-1、BmDNV-2分别与其对应的抗体产生杂交信号,而BmDNV-6与BmDNV-1、BmDNV-2和BmFV的抗体没有杂交信号,即BmDNV-6与BmDNV-1、BmDNV-2和BmFV没有血清学关系。 由于该病毒为单链DNA病毒,基因组大小约为6500nt,病毒在病蚕感染组织的细胞核中增殖,引起细胞核的膨大。根据病毒分类规则,它应属于浓核病毒。但它与已发现和分离的BmDNV-Ⅰ型和BmDNV-Ⅱ型没有血清学关系,并且与已发现的DNV病毒核酸大小不同。因