乳酸杆菌LB-19对肠道致病菌的体外抑制及其粘附Caco-2细胞的拮抗作用研究

【摘要】：本研究结合细菌学鉴定和16SrDNA序列分析法确定了乳酸杆菌LB-19 (LB-19)的分类地位,近而研究了LB-19及其耗尽培养上清(Spent CuLture Supernatant, SCS)对产肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxingenic E.coli, ETEC)和猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Choleraesuis, S.Choleraesuis)的体外抑制作用,对LB-19粘附人结肠癌上皮细胞(Caco-2),以及排斥、竞争与置换ETEC和S. Choleraesuis粘附该细胞的拮抗作用进行了研究。 鉴定结果显示,LB-19与约氏乳酸杆菌(Lactobacillus Johnsonii)的形态学特征及生理生化反应结果极为相近,两者的16SrDNA基因序列同源性也高达99%,因此最终确定并命名该菌株为约氏乳酸杆菌LB-19 (Lactobacillus Johnsonii LB-19)。 体外抑菌实验证实,当LB-19与ETEC和S. Choleraesuis按不同比例混合培养16h时,1：1混合培养的的LB-19对ETEC和S. Choleraesuis的抑制率达99.32%和99.65%,且此抑制率随混合液中LB-19菌体的增多而增大；当混合培养24h后,LB-19对两种致病菌的抑制率均达100.00%。SCS抑菌结果显示,只有pH值4.0的SCS才能对ETEC和S. Choleraesuis产生明显的抑制作用,且pH越低,抑菌效果越好。而pH2.0的SCS对ETEC和S. Choleraesuis的抑菌效果(18.6±0.15mm和20.5±0.28mm)约为相同pH的纯HCl溶液抑菌效果(7.83±1.10mm和8.00±1.23mm)的2.5倍。 粘附试验证实,用SCS悬浮的LB-19对Caco-2细胞的粘附数(25.05±3.92个菌／细胞)约为同等条件下用DMEM液悬浮的粘附数(11.51±3.20个菌／细胞)的2倍；在1.Ox 107CFU/mL-1.0x109CFU/mL的浓度范围和0.5-6h的粘附时间内,LB-19对Caco-2细胞的粘附数随LB-19浓度的增大显著上升,当浓度大于1.0x109CFU/mL和粘附6h后,粘附数增长趋势明显减缓。同时,1.00xl09CFU/mL的LB-19对ETEC和S. Choleraesuis的粘附都有很强的排斥、竞争和置换作用,粘附抑制率分别达99.96%、99.97%、99.88%和95.00%、100.00%、99.83%。