收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

苦荞MYB转录因子基因的克隆及转录激活功能鉴定

蒙华  
【摘要】:苦荞(Fagopyrum tataricum)又称鞑靼荞麦,属双子叶植物蓼科荞麦属一年生草本植物,是我国荞麦的主要栽培种之一,广泛分布于我国西南一些高寒、边远、干旱山区和少数民族聚居地。苦荞作为药食两用植物,除含有丰富的营养物质外,还富含具有药用和保健价值的类黄酮物质(主要成分为芦丁)。苦荞类黄酮的生物合成受代谢途径关键酶和转录因子的共同调节。作为植物转录因子家族之一的MYB转录因子,功能众多,除参与植物对环境因子和激素的应答,并对细胞分化、细胞周期、器官的形成以及叶片的形态建成均具有重要的调节作用外,对植物类黄酮代谢也具调控作用。本研究以苦荞为材料,对苦荞MYB转录因子基因进行克隆和序列分析,并对其转录激活功能进行初步鉴定,有助于加深对苦荞类黄酮生物合成调控的认识,为进一步通过分子育种培育高产类黄酮苦荞品种提供参考。主要研究结果如下: 1.根据植物MYB转录因子保守结合域设计简并引物,采用同源克隆的方法,以苦荞花蕾cDNA为模板克隆得到三条保守片段。采用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法克隆得到三条MYB转录因子的cDNA序列:FtMYB1(JF313345), FtMYB2(JF313347)和FtMYB3(JF313349).同时参考金荞(Fagopyrum dibotrys) FdMYBP1(EF522147)序列设计引物得到第四条苦荞MYB转录因子的cDNA序列FtMYB-P(HQ214132).对MYB基因编码的氨基酸序列分析表明:N端均含有两个重复的MYB结构域,为典型的R2R3型MYB转录因子,C端有一个推测的酸性激活域。进化树分析显示FtMYB1、FtMYB2和FtMYB-P与类黄酮代谢调控相关的MYB聚类。 2.采用PCR法扩增得到苦荞上述四个MYB转录因子的DNA序列。序列分析表明:FtMYB1,FtMYB2和FtMYB3含有两个内含子,FtMYB-P含有一个内含子,均符合"GU-AG"型剪切序列特征。 3.采用酵母单杂交技术验证四个苦荞MYB转录因子的转录激活活性。构建重组质粒pBridge-FtMYBl、pBridge-FtMYB2、pBridge-FtMYB3和pBridge-FtMYB-P,转入酵母菌AH109,转化子经SD营养缺陷培养基筛选,Whatman滤纸显色反应和β-半乳糖苷酶活性测定。结果显示,FtMYB1、FtMYB2和FtMYB-P滤纸显色反应呈阳性,β-半乳糖苷酶活性分别为29.37U、11.80U和28.10U,表明它们具有强弱不同的转录激活活性;而FtMYB3滤纸显色反应呈阴性,p-半乳糖苷酶活性仅为2.24U,初步推测FtMYB3转录活性非常微弱。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈清;汤浩茹;董晓莉;侯艳霞;罗娅;蒋艳;黄琼瑶;;植物Myb转录因子的研究进展[J];基因组学与应用生物学;2009年02期
2 杨晓磊;卢德勋;高民;卢媛;;猪脂肪细胞分化转录因子的研究进展[J];畜牧与饲料科学;2008年03期
3 赵艳;刘晓鑫;张庆林;王英;李景文;王庆钰;;大豆种子特异性启动子研究进展[J];大豆科学;2010年01期
4 金慧;栾雨时;;转录因子在植物抗病基因工程中的研究进展[J];中国生物工程杂志;2010年10期
5 邱志刚;刘沛;翟朝增;徐兆师;李连城;陈明;马有志;;小麦TaBS1转录因子基因的克隆、原核表达及Western blot检测[J];麦类作物学报;2011年02期
6 刘坤;单国芳;李付广;刘传亮;张朝军;张雪妍;武芝侠;;海岛棉ERF族转录因子EREB6基因克隆及特征分析[J];河南师范大学学报(自然科学版);2011年02期
7 陈俊,王宗阳;植物MYB类转录因子研究进展[J];植物生理与分子生物学学报;2002年02期
8 滕勇,杨海明,经荣斌;POU1F1基因结构特征及其与遗传性疾病的相关性研究[J];吉林农业大学学报;2004年03期
9 王呈玉;张明哲;万生生;吕世友;马兰青;李彦舫;;短芒大麦DREB1基因的克隆与特性分析[J];吉林农业大学学报;2006年05期
10 陈金焕;夏新莉;尹伟伦;;植物DREB转录因子及其转基因研究进展[J];分子植物育种;2007年S1期
11 蒋瑶;胡尚连;孙霞;黄胜雄;;拟南芥bZIP基因家族系统发育树比较分析[J];华北农学报;2008年01期
12 李昊文;赵军;;非生物逆境信号转导的分子机制[J];中国农业科技导报;2008年S1期
13 晁月文;李竞芸;张广辉;;彩叶植物呈色机理及其育种研究进展[J];江苏林业科技;2008年04期
14 王晓飞;程宪国;王迎波;吴庆钰;白由路;梁永超;;Floral-dip法大豆GmDREB转录因子转拟南芥研究[J];生物技术通报;2008年05期
15 郭兆奎;杨谦;颜培强;万秀清;;黄花烟草K~+通道基因NKC1克隆与序列分析[J];中国烟草学报;2008年05期
16 王育娜;贺俐;曹蕾;赖燕;牟少亮;何水林;;辣椒推定WRKY基因cDNA的生物信息学分析[J];中国农学通报;2008年11期
17 陈坚;兰涛;段远霖;刁志娟;童治军;连肖华;吴为人;;水稻中SUSIBA2相似基因RNA干扰体系的建立[J];福建农林大学学报(自然科学版);2009年01期
18 梁崇;冯宇梅;彭日荷;熊爱生;薛永;李贤;姚泉洪;黄英金;;水稻WRKY16基因分析及其转化拟南芥研究[J];上海农业学报;2009年03期
19 王琦琳;牛向丽;刘永胜;;玉米两个功能未知转录因子基因的转录后加工[J];应用与环境生物学报;2009年04期
20 王丽芳;杜希华;于涌鲲;赵福宽;孙清鹏;;番茄WRKY转录因子基因片段的克隆及序列分析[J];中国农学通报;2009年23期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 伍翀;杨兆春;秦双双;袁媛;黄璐琦;陈平;;植物MYB转录因子研究进展[A];中华中医药学会第十届中药鉴定学术会议暨WHO中药材鉴定方法和技术研讨会论文集[C];2010年
2 高峰;夏瑞强;熊爱生;肖宁;洪义欢;姚泉洪;陈建民;;水稻AP2/EREBP类转录因子基因的功能研究[A];江苏省遗传学会植物分子育种学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
3 邸鹏;陈万生;张磊;;构建“转录因子-启动子”耦联载体开展植物生物碱次生代谢工程[A];中国植物学会七十五周年年会论文摘要汇编(1933-2008)[C];2008年
4 吴艳;徐岚;周迎会;吴士良;;人类β1,3半乳糖基转移酶7(UDP-Gal:betaGlcNAc beta 1,3-galactosyltransferase polypeptide 7)催化功能的研究以及该基因表达与转录因子ets-1的相关性的探索[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年
5 吴艳;徐岚;吴士良;;人类β3GalT7/GNT8 (UDP-Gal:betaGlcNAc beta 1,3-galactosyltransferase polypeptide 7)催化功能的研究以及该基因表达与转录因子ets-1的相关性的探索[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
6 李肖霞;宋一萌;朱振久;付成来;李承红;朱毅;;转录因子KLFs在血管内皮祖细胞增殖分化中的作用[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
7 李蕾;谢丙炎;戴小枫;杨宇红;;辣椒抗病相关WRKY转录因子基因的分离及特征分析[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
8 郭振飞;赵雅清;;黄花苜蓿EREBP基因的克隆、表达及功能鉴定[A];2007年全国植物生长物质研讨会论文摘要汇编[C];2007年
9 郑毅;陈永平;;转录因子FoxO1与肝纤维化[A];传染病诊治高峰论坛暨2007年浙江省感染病学、肝病学学术年会论文汇编[C];2007年
10 周贤尧;刘红霞;董娜;张增艳;;抗性相关转录因子TaPIMP1基因的分离和功能的初步研究[A];2009年中国作物学会学术年会论文摘要集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高建杰;苹果两个MYB转录因子基因的克隆与功能分析[D];南京农业大学;2011年
2 刘翔;与海岛棉纤维发育相关AG-Subfamily和MYB类转录因子的功能研究[D];上海交通大学;2009年
3 董娜;病原诱导的小麦ERF、MYB转录因子基因TaPIEP1和TaPIMP1的分离、特性及功能分析[D];中国农业科学院;2008年
4 白延红;烟草花青素合成相关基因及转录因子基因的克隆与功能验证研究[D];西北农林科技大学;2012年
5 张蔚;与表皮毛发育相关的MYB家族基因对转基因烟草花色的影响[D];华中农业大学;2009年
6 牛姗姗;MYB对杨梅果实花青素苷合成的调控及其机制[D];浙江大学;2011年
7 宿福园;参与柿单宁代谢的MYB、bHLH及WD40转录因子基因的克隆及分析[D];华中农业大学;2012年
8 庄静;大白菜和甘蓝型油菜AP2/ERF家族转录因子的克隆与分析[D];南京农业大学;2009年
9 邱志刚;小麦DREB/ERF转录因子相互作用蛋白质的筛选与验证[D];中国农业科学院;2010年
10 姚春霞;GATA转录因子对心肌能量代谢及细胞增殖的调控机制研究[D];郑州大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘淑君;番茄MYB转录因子的鉴定及其表达分析[D];浙江师范大学;2012年
2 伍翀;黄芩MYB转录因子功能初步研究[D];武汉工业学院;2012年
3 潘宝华;桑树苯丙氨酸解氨酶和MYB转录因子基因克隆与表达分析[D];江苏科技大学;2011年
4 蒙华;苦荞MYB转录因子基因的克隆及转录激活功能鉴定[D];四川农业大学;2011年
5 罗曦;玉米MYB转录因子靶基因的全基因组预测及验证[D];四川农业大学;2012年
6 阎淑滑;‘津田’芜菁MYB类转录因子BrMYB77的克隆及遗传转化[D];东北林业大学;2011年
7 王弘雪;与茶树类黄酮合成相关的MYB转录因子的克隆及表达研究[D];安徽农业大学;2012年
8 魏潇;红根甘肃桃(Prunus kansuensis L.)抗根结线虫相关MYB转录因子基因的克隆与定位[D];中国农业科学院;2010年
9 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
10 刘守梅;石斛MYB类转录因子基因克隆和功能初步研究[D];杭州师范大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王小龙;科学家提高了多功能干细胞安全性[N];科技日报;2009年
2 白毅;UXT蛋白可增强转录因子NF—κB活性[N];中国医药报;2007年
3 香港麦迪信医学出版有限公司 供稿;凋亡与肿瘤:一对矛盾的连体婴[N];医药经济报;2002年
4 陈勇;专家有突破 借助基因杀死癌细胞[N];人民日报;2005年
5 本报记者 冯卫东;向左分裂向右分化[N];科技日报;2009年
6 记者胡德荣;我国科学家培育出猪“万能”干细胞[N];健康报;2009年
7 记者 陈勇;美专家绘出大脑关键区域基因“分布图”[N];新华每日电讯;2004年
8 胡德荣;我国揭示NF—κB细胞核内调控新机制[N];中国医药报;2007年
9 黄苏榕;中科院上海神经所发现中、小脑发育不全分子机制[N];中国医药报;2007年
10 白毅;β—arrestin1蛋白核内新功能被发现[N];中国医药报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978