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稻曲病侵染特性与拮抗菌的研究

代海霞  
【摘要】:本试验主要通过根据水稻不同生长期的特征,在水稻箭叶与倒二叶叶舌齐平时套袋处理。水稻破口及破口前10d、破口前7d、破口前4d用拟水平正交试验对影响人工接种稻曲病发病率的条件进行优化以获得最佳接种时期、接种病原菌体(分生孢子和菌丝的混合菌体,分生孢子,菌丝片段和厚垣孢子)和接种方法(注射接种,喷雾接种,滴灌);始穗期和齐穗期分别以不同的接种方法接种四种不同的病原菌。试验结果表明,接种时期对人工接种发病率有极显著的影响,而接种菌体和接种方法对发病率不显著,因而最终筛选的最优水平组合为在水稻破口前4d注射接种菌丝-分生孢子的混合菌体,此时病粒率最高,达13.75%;在始穗期和齐穗期不同接种方法接种的四种病原菌体的发病率均为零。这为室内接种稻曲病菌,对稻曲病侵染时期、侵染路径研究试验提供了试验基础。 室内震荡培养稻曲病菌结果发现,震荡培养10d左右菌丝生长和产孢能力均是最强;分生孢子萌发活性测定试验表明,在24h以后的时间段,萌发率达到80%以上;分别对人工保存一年的黄色和墨绿色稻曲球的厚垣孢子进行萌发试验证明,黄色厚垣孢子活力比墨绿色孢子强,但黄色孢子萌发力很弱,48h时的萌发率最大的仅有6.42%。 从同一水稻品种(冈优305)的分蘖期、孕穗期、抽穗期、乳熟期、黄熟期的茎干、叶片叶鞘、植株根际周围土壤及其乳熟期和黄熟期的发病谷粒和健康谷粒采集样本共95份,分离纯化获得166株细菌。水稻不同生育期的不同样品中细菌总量与稻曲病拮抗细菌的研究表明,茎干、叶片叶鞘和根基周围土壤样品在各个生育期的细菌数大致都在分蘖期最大,然后随着水稻的成熟逐渐下降,腐烂谷粒和健康谷粒中细菌量在黄熟期最大,并且是随着水稻的成熟有上升的趋势;在不同样品中以土壤中分离到的细菌数最高,对稻曲病菌有拮抗能力的细菌也以土壤中最高。通过抑菌法及培养液法测定对水稻稻曲病的拮抗能力,结果显示,土壤中的3株菌株对稻曲病菌具有较强拮抗作用的细菌,占分离到的细菌1.81%,编号分别为Ⅲ-A9、Ⅲ-B1、Ⅲ-B31、其中Ⅲ-B31的拮抗能力最强,发酵液对稻曲病菌的抑菌率为78.95%,Ⅲ-B1其次,Ⅲ-A9的拮抗能力最弱为49.12%。对这三株拮抗细菌进行培养特征、革兰氏染色鉴定,三种细菌均为革兰氏阳性细菌,细胞为直杆状,有芽孢,有鞭毛,好氧生长,可初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus)的细菌。 通过单因素试验对三种拮抗细菌的发酵条件优化研究表明,发酵时间、发酵温度、接种量和装液量对细菌生长菌数量有着很明显的影响作用。最适震荡发酵条件为:时间是36h-48h,温度为28℃-30℃,接种量3%,装液量为100mL/500mL。对无菌发酵液对稻曲病菌生长的试验结果表明,发酵液对菌丝生长有明显的抑制作用,导致病菌不能形成菌丝球,Ⅲ-B31菌株对分生孢子萌发的抑制率高达92.47%,对厚垣孢子萌发抑制率达88.61%,Ⅲ-B1拮抗作用其次,Ⅲ-A9最弱。


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