收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)抑制黄曲霉的作用研究

刘丁  
【摘要】:黄曲霉(Aspergillus flavus)及其毒素(AFT)对粮食产品、各种食品和饲料的污染严重威胁到人、畜健康,各种产品的安全无毒贮存是现今国内外关注的问题,其中黄曲霉及其毒素的生物防治已成为研究的热点,并且由于其对环境友好、防治效果明显等优势越来越受到人们的重视。分离筛选出对黄曲霉具有抑制作用的拮抗菌,并采用生物化学方法分离提取抑制黄曲霉生长和产毒的有效成分,从机理上阐明拮抗菌的作用途径,既有理论价值,又有实践意义。 本论文旨在将实验室前期从土壤中分离筛选的1株对黄曲霉具有拮抗作用的萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)进一步深入研究。从营养竞争、直接寄生、诱导寄主抗性和抗生作用多个方面探讨该株拮抗菌抑制黄曲霉的作用途径。 营养竞争作用从萎缩芽孢杆菌对黄曲霉生长的抑制和对其孢子萌发的抑制两方面进行探讨。结果表明,萎缩芽孢杆菌的各处理液对黄曲霉的生长及孢子萌发均有-定作用;其中培养液原液和菌体悬浮液的效果最好,说明萎缩芽孢杆菌与黄曲霉之间具有明显的营养竞争关系;无菌上清液也表现出对黄曲霉生长的抑制作用。 直接寄生作用从萎缩芽孢杆菌对黄曲霉菌丝生长的抑制和对菌丝形态的影响两方面进行探讨。结果表明,萎缩芽孢杆菌的培养液原液对黄曲霉菌丝生长的抑制效果最佳,其次是萎缩芽孢杆菌的菌体悬浮液,无菌上清液和经高压灭菌处理的培养液对黄曲霉菌丝生长几乎无影响。经培养液原液和菌体悬浮液处理的菌丝形态明显变异,呈现出扭曲、散乱、中部膨大呈念珠状、部分细胞内容物流出呈空腔、局部消融等特征。 诱导寄主抗性作用采用接种黄曲霉和萎缩芽孢杆菌不同处理液至花生样品上的方法,通过测定抗性相关酶(SOD, CAT, PAL, POD, PPO)的活性变化来进行探究。结果表明,萎缩芽孢杆菌的各处理液能有效的提高SOD酶活性和POD酶活性,使CAT酶活性下降,但对PAL酶活性和PPO酶活性的诱导作用不明显。 通过营养竞争作用和诱导寄主抗性研究发现,萎缩芽孢杆菌培养液无菌上清液中可能含有一种或几种萎缩芽孢杆菌的次级代谢产物,具有拮抗黄曲霉的作用,这说明萎缩芽孢杆菌对黄曲霉具有抗生作用。通过正交实验优化发酵条件,确定最佳发酵条件为:培养温度35℃,培养时间48h,接种量1.5%,摇床转速180r/min,培养基初始pH7.0,液体培养基装液量30mL。从硫酸铵沉淀、浓盐酸沉淀、乙醇沉淀和有机溶剂萃取多种方法中确定80%饱和度硫酸铵沉淀作为粗提的方法。并通过SephadexG-25脱盐和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析分离纯化培养液中的抗菌活性物质;再由SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE电泳方法检测抗菌蛋白的分子量,发现SDS-PAGE电泳中无蛋白条带显示,Tricine-SDS-PAGE小肽电泳,经银染后可明显看到一条蛋白条带,其分子量约为5.8KDa。液质联用检测后通过重合率大小比对,发现抗菌活性物质与各蛋白质的氨基酸序列相似性均不太高,其中相似性最高的蛋白YnfF protein与之重合率仅为17.61%,这表明该抗菌活性物质很可能不是这些蛋白质中的一种,推测其可能为一种尚未见研究报道的新物质。通过红外光谱扫描证实萎缩芽孢杆菌抗菌活性物质的主要成分是蛋白质,且其中主要包含的基团有:N-H、C-H、-C=C=C-、C-N。 抗菌活性物质的生物学特性研究结果表明,抗菌活性物质的热稳定性、pH稳定性和有机溶剂耐受力较好,木瓜蛋白酶能降解其中部分的抑菌物质,但仍具有一定的抑菌活性;茚三酮和双缩脲反应均呈阳性。该物质对多种病原真菌具有抑制作用,具有广谱抑菌效果;确定其最低抑菌浓度为20μg/mL;抗菌效价研究发现,1mL抗菌活性物质中有效抑菌成分的含量相当于约1.5mg山梨酸钾。抗菌活性物质在活体上对黄曲霉生长的抑制实验结果表明,不同浓度抗菌活性物质处理的花生上,黄曲霉的生长均受到明显的抑制,并且随着花生上蛋白质含量的增多,黄曲霉的生长量逐渐减少,当蛋白浓度达到80μg/mL时,肉眼几乎看不到黄曲霉的生长。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前17条
1 马顶虹;龚海燕;李萌萌;李备军;汤琳;张明;;萎缩芽孢杆菌生理生化特征与检测鉴定[J];安徽农学通报;2014年07期
2 胡长利;向新华;韩晓旭;云战友;黄小平;;耐热芽孢杆菌(Bacillus sporothermodurans)的研究进展概述[J];食品安全质量检测学报;2015年07期
3 王文娟;孙冬岩;邓风雷;孙笑非;;饲用芽孢杆菌的益生功能及其在水产养殖中的应用[J];饲料研究;2014年13期
4 罗毅;戴晋军;;芽孢杆菌的作用原理及在蛋鸡中的应用[J];饲料研究;2009年04期
5 刘学剑;饲用芽孢杆菌的研究和应用[J];广东饲料;2005年02期
6 栾向东,王静,杨晓丽;难辨梭状芽孢杆菌性肠炎28例临床分析[J];泰山医学院学报;2004年04期
7 刘世珍;;Applied Microbiology公司在重组芽孢杆菌方面的研究[J];生物技术通报;1988年07期
8 孙庆祥;秦翠颜;;黄麻和红麻微生物脱胶研究 Ⅰ多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)T1163的分离、鉴定和脱胶试验[J];中国麻作;1988年03期
9 乔明强,蔡宝立,蒋如璋,高才昌,郎艳军,樊廷玉,苏同芳;芽孢杆菌基因工程新载体的构建[J];遗传学报;1989年05期
10 陶涛;陆志宇;;嗜碱芽孢杆菌42-14噬菌体的分离及其部分特性[J];武汉大学学报(自然科学版);1989年03期
11 潘慧青;张炎达;肖建设;;饲用益生芽孢杆菌在畜禽无抗养殖中的应用研究[J];中国饲料;2019年03期
12 栾嘉明;李月明;张敏;耿春银;;芽孢杆菌在反刍动物生产中的研究进展[J];饲料研究;2019年03期
13 张震;谢和;张文杰;龙金花;;贵州西南喀斯特地区土壤芽孢杆菌资源及多样性研究[J];山地农业生物学报;2017年05期
14 刘秀丽;成立新;凤英;李锋;裴乐;石晓娜;乔健敏;侯勇跃;;健康反刍动物源饲用芽孢杆菌的分离筛选和鉴定[J];当代畜牧;2018年15期
15 陈国海;;水产养殖中益生芽孢杆菌的应用[J];养殖与饲料;2017年01期
16 徐培军;;水产养殖中益生芽孢杆菌的应用[J];农业与技术;2017年14期
17 刘新梅;程逸宇;薛建丽;王超超;胡文彦;杨军;;基于测定愈创木酚的脂环酸芽孢杆菌快速检测方法比较[J];食品科技;2013年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨辉;赵芳;梁海秋;王发合;周河治;;类芽孢杆菌发酵生产胆固醇氧化酶的研究[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
2 刘忠梅;王琦;梅汝鸿;;植物内生芽孢杆菌作用机理初探[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
3 范斌;唐磊;赵世林;佘林荣;宋增福;;一株具水霉抑制特性芽孢杆菌的筛选及其分子生物学鉴定[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 滕超;袁梦龙;陈明;张维;;三株耐盐嗜碱芽孢杆菌的分离与初步鉴定[A];第二届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会论文摘要集[C];2010年
5 高梅影;戴顺英;彭可凡;;重组广谱苏云金芽孢杆菌工程菌生态安全性研究之一:工程菌的重组质粒向同生境中其它芽孢杆菌的转移[A];武汉市首届学术年会论文集[C];2004年
6 杨柳;张邑帆;郑华;黄萍;黄金秀;杨飞云;;乳酸芽孢杆菌的分离、筛选及抗逆性研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会论文集[C];2014年
7 王庆;付文娟;王香萍;梅晓明;马艳华;;芽孢杆菌在动物养殖中的应用策略[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会论文集[C];2018年
8 田涛;王琦;梅汝鸿;;芽孢杆菌绿色荧光蛋白标记系统的建立[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
9 高学文;;芽孢杆菌资源发掘与创新利用[A];江苏省植物病理学会第十二次会员代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2013年
10 冯书亮;王容燕;曹伟平;王金耀;杜立新;;苏云金杆菌与其它芽孢杆菌在土壤中消长动态关系的研究[A];第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵鑫;芽胞杆菌BH072抗菌因子的鉴定及其抗菌活性的研究[D];天津大学;2017年
2 刘伟;芽孢杆菌(Bacillus spp.)拮抗菌株的筛选及TasA基因研究[D];福建农林大学;2006年
3 史劲松;耐冷菌Bacillus cereus SYP A2-3产冷适蛋白酶的研究[D];江南大学;2006年
4 龚萌;芽孢杆菌PY-1的菌种鉴定及其抗真菌产物的分离纯化、性质研究和结构鉴定[D];四川大学;2006年
5 谢永丽;青海不同生境芽孢杆菌多样性分析、生防菌筛选及其抗病促生机理研究[D];南京农业大学;2014年
6 张言周;Bacillus altitudinis SYBC hb4的分离鉴定及其过氧化氢酶性质与应用研究[D];江南大学;2016年
7 焦凌霞;DnaK基因调控酸土脂环酸芽孢杆菌嗜酸耐热生理特性研究[D];西北农林科技大学;2012年
8 蔡瑞;脂环酸芽孢杆菌产愈创木酚代谢途径解析及检测控制方法研究[D];西北农林科技大学;2016年
9 柏映国;脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus sp.A4)部分糖基水解酶研究及其基因组序列初步分析[D];中国农业科学院;2010年
10 王周利;苹果汁中脂环酸芽孢杆菌免疫磁性分离及快速检测技术研究[D];西北农林科技大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘丁;萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)抑制黄曲霉的作用研究[D];四川农业大学;2013年
2 马顶虹;萎缩芽孢杆菌检测方法的制定[D];华东师范大学;2014年
3 鲁瑞娟;一株水产用益生芽孢杆菌的筛选及益生特性研究[D];河南科技大学;2019年
4 林而舒;芽孢杆菌Bacillus sp.K5脱氮性能和相应机理探究[D];福建农林大学;2019年
5 冯鑫;酸土脂环酸芽孢杆菌耐热关键蛋白筛选及互作网络分析[D];河南科技学院;2019年
6 张腾帅;季节变化对散养芦花鸡肠道菌群的影响及肠道益生芽孢杆菌的筛选[D];河北科技师范学院;2019年
7 郭萌萌;复合益生菌发酵全株玉米、玉米秸秆及豆粕的效果研究[D];西北农林科技大学;2019年
8 郑香香;芽孢杆菌对杏和桃采后链格孢菌的防治效果及抑菌作用研究[D];天津商业大学;2019年
9 郑雅心;萎缩芽孢杆菌SF1拮抗蛋白生防功能研究[D];内蒙古大学;2019年
10 袁慧坤;日粮中添加芽孢杆菌对北京鸭生长性能、肠道菌群的影响[D];东北农业大学;2019年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 王芳 编译;难辨梭状芽孢杆菌快速传播[N];北京科技报;2013年
2 记者王俊鸣;美发现抗病毒孢子的人体抗体[N];科技日报;2002年
3 驻昆山首席记者 朱新国;检测芽孢杆菌,有办法了[N];苏州日报;2016年
4 记者 高建进;我国发现地球微生物新种:兵马俑芽孢杆菌[N];光明日报;2014年
5 刘刚;萎缩芽孢杆菌XW2胞外蛋白具有潜在田间应用前景[N];山东科技报;2018年
6 陆敬雷李春宁 记者 苏彤晖;新沂生物农药芽孢杆菌AR156制剂项目启动[N];徐州日报;2007年
7 柯继;芽孢杆菌用于龙眼保鲜获成功[N];中国食品报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978