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华重楼组织培养体系建立的研究

臧薇  
【摘要】:华重楼(Paris polyphylla var. chinensis),是延龄草科重楼属多叶重楼(Paris polyphylla)的变种。重楼是我国传统的中药,根茎入药,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊等功效。中国药典收录的药用重楼为滇重楼和华重楼。 由于重楼生长缓慢、再生周期长,随着市场的需求量与日俱增,供需矛盾日趋严重。而组织培养具有取材少、繁殖系数高、可周年生产等优点,一旦成功具有很大的现实意义。 本人对华重楼根茎在实验室条件下进行了引种驯化的研究,并对华重楼离体培养存在的多种问题进行了有益探索,主要研究结果如下: 1.设计了沙土、腐叶土、壤土以及沙土:腐叶土=1:1、沙土:壤土=1:1、腐叶土:壤土=1:1六种土壤种类用于华重楼根茎实验室条件下的引种驯化,结果显示:壤土:腐叶土=1:1效果最佳,死亡率、新根发生率和出苗率分别为9.44%、45.00%、77.8%;效果最差的是沙土,死亡率、新根发生率以及出苗率分别为38.34%、16.67%、38.89%。 2.分别于重楼根茎取材后放置一周、两周、一个月、三个月、六个月进行接种,结果显示:不同放置时间对华重楼根茎无菌培养体系建立有很大影响,随着放置时间增长,污染率及褐化率持续增加,成活率则不断下降。放置一个月相较于放置一周,污染率提高了36.50%;取材三个月污染率已接近80%,不适宜再用作组织培养。随着培养时间延长、污染率与褐化率持续增加,成活率也相应的下降,放置一个月时成活率已经降至12.70%,三个月后成活率低于3.2%,不适宜再用作组织培养。 3.设计了五种广谱抑菌剂(多菌灵、百菌清、杀毒矾、托布津、乙蒜素)共十个浓度和四种抗生素(阿米卡星、庆大霉素、链霉素、头孢他啶)共八个浓度,研究不同预处理对华重楼根茎无菌培养体系建立的影响,结果显示:广谱抑菌剂以0.5%多菌灵的抑菌效果较佳,分别使细菌污染率、真菌污染率和总污染率降低较CK1降低19.04%、7.93%、26.98%;0.1%杀毒矾效果最差。抗生素的八个浓度中100mg/L头孢他啶的效果最佳,分别使细菌型污染率、真菌型污染率及总污染率降低39.68%、11.11%、50.79%;其他三组抗生素的效果均不理想。 4.采用MS作为基础培养基,附加不同浓度的6-BA、NAA、IBA,共十二种激素配比,研究对华重楼根茎愈伤组织诱导的影响。结果显示:对于华重楼愈伤组织诱导效果最佳的是6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L,褐化率、启动率和愈伤组织诱导率分别为39.68%、60.31%、30.16%;其次是6-BA2.0mg/L+BA1.0mg/L,褐化率、启动率和愈伤组织诱导率分别为52.38%、65.08%、23.81%;效果最差的是6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L。 5.采用华重楼的不同部位作为诱导愈伤组织的外植体,效果具有很大差异:以顶芽和根茎作为外植体可以诱导出愈伤组织,华重楼的地上部位(叶片、花萼片、茎段、花柄)作为外植体均不能诱导出愈伤组织。其中顶芽的启动率和愈伤组织诱导率最高,分别为34.86%、15.00%。 6.设计了不同切割方式,研究其对华重楼根茎愈伤组织诱导的影响,结果显示:以顶芽作为外植体时随着平切位置的下移,污染率不断降低,而启动率和愈伤组织诱导率差异不显著;对剖可以显著的提高启动率和愈伤组织诱导率,同时也使污染率一定程度的增加。 7.采用MS作为基础培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA,共六种激素配比,研究对华重楼根茎成苗诱导的影响。结果显示:6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L对华重楼成苗诱导效果最佳,死亡率、成苗诱导率分别为19.05%、80.93%、且幼苗深绿色,高约3.5cm,生长健壮;6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L效果最差,死亡率、成苗诱导率分别为42.86%、57.14%,且幼苗幼苗黄绿色,高约2cm,生长细弱。


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