苦荞毛状根的诱导及高频再生体系的建立

【摘要】：苦荞是一种古老的一年生双子叶草本植物,它广泛分布于世界各地,具有适应性强、耐干旱、耐贫瘠、抗盐碱等特点。苦荞起源于我国,其具有极高的营养保健功能,同时兼具优秀的食疗作用以及卓越的药用价值,是许多绿色食品和重要功能性食品的生产原料。本研究以园子荞、川荞1号和九江苦荞三种不同苦荞品种为试验材料,建立了一个高效的经由发根农杆菌诱导的苦荞毛状根培养体系。同时,深入探讨了影响毛状根诱导的诸多因素。试验发现,发根农杆菌A4对苦荞毛状根的诱导能力最好,园子荞较其他两种苦荞更易诱导苦荞毛状根的产生。经过两天的预培养,利用发根农杆菌A4菌液侵染园子荞下胚轴,其毛状根诱导效果最好,诱导率可达到83.6%。本研究还以园子荞和九江苦荞两种不同苦养品种为试验材料,利用不同外植体,不同培养基进行诱导培养,成功建立了经由体细胞胚胎途径的苦荞高频再生体系。结果表明：苦荞下胚轴的再生能力最好,园子荞的再生能力较强；最佳愈伤组织诱导培养基为MS培养基中添加2.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L KT,其诱导率可达98.94%;最佳芽分化培养基为MS培养基中添加1.0 mg/L KT和2.0 mg/L 6-BA,其诱导率可达55.53%；最佳生根培养基为1/2MS培养基中添加1.0 mg/L IBA,其生根率高达86%。同时,我们还以苦荞顶端分生组织为外植体,通过直接诱导丛生芽的产生,首次建立了经由组织器官途径的苦荞高频再生体系。其最佳丛生芽诱导培养基为MS培养基中添加2.0 mg/L 6-BA和0.5 mg/L TDZ,最高芽分化率达69.05%,平均外植体出芽数最高可达18个。