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枇杷胚乳离体培养及植株再生的研究

彭晓军  
【摘要】: 本研究以大五星枇杷胚乳为外植体进行胚乳愈伤组织诱导及植株再生的研究,重点研究了愈伤组织诱导、不定芽分化、胚状体诱导、芽苗生根、生根苗炼苗移栽等有关问题。结果表明: 1)材料消毒的最好方法是:果实去宿萼并刮去其上的绒毛→自来水冲洗1hr左右→75%的酒精浸泡10min→无菌水冲洗1次→无菌条件下剥取种子叫种子投入0.1%升汞中浸泡4min→无菌条件下剥离幼果胚乳进行培养。 2)胚乳培养的取材时期以授粉后7周左右,幼果果皮几乎绿色、绒毛与宿萼大部分脱落、果实横径9.4~11.9mm为宜,此时胚乳处于细胞型期。 3)幼果在2~4℃C的冰箱中处理17天,取其胚乳接种在MS+6-BA2mg/l+2,4-D0.5mg/l的培养基中,愈伤组织诱导率最高达35%;在含GA_31mg/l、2,4-D0.1mg/l、6-BA5mg/l的MS培养基上预培养2~4天也能明显提高愈伤组织的诱导频率。 4)不带胚的枇杷胚乳能产生愈伤组织,有胚参与则能明显提高愈伤组织的诱导频率;GA_3能部分或全部取代胚的作用。 5)胚乳在MS+6-BA2mg/l+2,4-D0.5-0.7mg/l+GA_30.4mg/l的脱分化培养基上培养,愈伤组织的诱导频率较高,最高达33.3%。 6)较小的愈伤组织块(0.15g左右)在MS+6-BA2mg/l+2,4-D0.5mg/l增殖效果较好,随着继代数的增加,愈伤组织增殖率显著下降。 7)愈伤组织在MS+Ze2-3mg/l+NAA0.1mg/l的培养基上培养30天后,再转入原培养基附加0.3mg/l6-BA的培养基中诱导分化不定芽效果较好。所得芽苗在MS+6-BA0.5mg/l+KT0.5mg/l+IBA0.02mg/1+NAA0.02的培养基上增殖效果最好,增殖殖系数为3.2。 8)在MS+6-BA2mg/l+2,4-D0.5mg/l上培养20天,转至MS+6-BA2mg/l+2,4-D0.3mg/l+NAA0.5mg/l培养基上继代两次,能产生淡黄色胚状体,胚状体在MS+6BA0.5mg/l+IBA0.02mg/l的培养基上长出芽苗,不见根的发生;一定浓度的GA_3对产生胚状体也有一定促进作用。 9)健壮的单苗在含AC0.2%、IBA与NAA各0.25mg/l的1/2MS培养基上培养的生根效果较好,最高生根率达80%。 10)在加有活性炭的培养基上得到的生根苗,经过5~7天炼苗处理,在珍珠岩与蛭石1:1的基质上移栽成活率高达80%,明显优于菜园土与沙作基质的成活率。


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