大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）下丘脑cDNA 文库的构建

【摘要】：本研究以大熊猫的下丘脑组织为实验材料，利用TRlzol试剂从大熊猫下丘脑组织抽提总RNA，获得了5S、18S、28S三条带比较明显，纯度高、质量好且没有降解的总RNA。用oligo(dT)-纤维素层析法从总RNA中成功纯化出无二级结构的poly(A) ~+mRNA。以mRNA为模板合成大小在100-500bp间的cDNA，获得的cDNA通过Sepharose CL-2B树脂柱按大小分级，回收cDNA大片段，然后将cDNA连接到Uni-ZAP XR质粒载体中，重组载体包装上蛋白质外壳，获得了滴度为1.129×10~6 clones／μg Uni-ZAP XR Vector的噬菌体cDNA初级文库。噬菌体感染宿主菌并增殖，最终获得库容量为5.2×10~9 pfu／ml、平均片段为300bp-500bp以上的扩增文库。 本研究为解决大熊猫繁殖力低、不易受孕、发情不易判断等繁殖问题提供了一个重要的基因表达库资源，并为进一步克隆研究与多种生命活动相关的基因提供了有力的手段，为进一步研究基因对器官、组织、细胞生理功能直至对整个有机体生长发育过程的调控机制、个体发育过程中细胞的分化、衰老和凋亡调控、健康与疾病发生等生命现象的分子机制奠定了基础。