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PRRSV-SCQ株结构基因生物信息学及人工感染仔猪病理变化与超微结构研究

颜其贵  
【摘要】:猪生殖和呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),又称蓝耳病(Blue-ear disease)是由动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种新的病毒性传染病,是一种以导致母猪发热、厌食、早产、流产、死胎等繁殖障碍及仔猪高死亡率和育成猪呼吸困难、发育迟缓为特征的新病。该病自发现以来已给世界各国养猪业造成了巨大的经济损失。病毒基因组约15kb,包括为聚合酶编码的最大的阅读框ORF1和为结构蛋白基因编码的阅读框ORF2-ORF7。本研究以频繁发生繁殖障碍症候群的母猪、出现顽固性呼吸症状和较高死亡率的仔猪饲养场为研究对象,运用血清流行病学调查方法(ELISA检测方法),对四川地区(包括重庆市的部分县市)的大型规模化猪场的种猪、部分商品猪群以及小型种猪场采取抽样和有针对性地对引种种猪进行PRRS的血清学调查。然后进行病毒的分离和病毒的分子生物学研究。主要研究包括: 1.运用IDEXX公司生产的ELISA检测试剂盒对所采集的血清样品进行检测。结果表明,收集的873份血清中,血清抗体阳性占326份,抗体阳性率为37.34%;其中:种母猪(包括后备猪)PRRSV抗体阳性率为38.29%(219/572),仔猪包括哺乳仔猪和断奶仔猪阳性率为36.84%(98/266),种公猪阳性率为25.71%(9/35)。 2.以出现繁殖障碍的母猪的血清并通过ELISA检测为抗体阳性者,接种Marc-145单层细胞,经盲传至第四代时出现典型的细胞病变效应(CPE);细胞培养物经电镜观察,发现其中有球形的病毒粒子,粒子大小为40-80nm,核心直径为20-40nm;用抗PRRSV特异性抗体能特异地中和病毒,中和指数为100,并将该地方分离株命名为PRRSV-SCQ;病毒毒力测定TCID_(50)为10~(-1.16)/0.05ml。根据Genbank中PRRSV北美洲株ATCC VR-2332的序列设计一对特异性引物,以PRRSV-SCQ RNA为模板,通过RT-PCR扩增其GP5基因片段,并将该片段插入克隆载体pMD 18-T的EcoRV位点;测序结果表明该GP5基因序列与PRRSV-VR2332、LV株的GP5基因核苷酸序列同源性分别为99.7%和61.6%,揭示SCQ地方分离株与VR2332株在基因型上更为接近,应属于美洲型。 3.成功地建立了分离株SCQ人工感染断奶仔猪的病理模型。利用本地分离株PRRSV-SCQ接种断奶仔猪,显微检查以肺泡隔增宽并有巨噬细胞增生为特点的增生性间质性肺炎以及发生广泛性微循环障碍所引起的病理变化具有一定的典型示病性。超微病理观察表明,在肺脏、肝脏、肾脏、淋巴结和脾脏中,出现病变的细胞都有不同


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