间接夹心ELISA检测鸭肿头败血症病毒的研究

【摘要】：近年来,四川等地出现了一种具有发病急、传播快、死亡率高等特点的一种新型鸭病毒性烈性传染病,各种年龄,各种品种鸭均易感,发病率和死亡率均可达80%以上,给当地养鸭业带来极大的损失。出于“鸭肿头败血症”与鸭瘟等疫病在临床症状、病理变化等方面有许多相似之处,给临床诊断带来困难。为了更好的防制“鸭肿头败血症”,减少其带来的巨大损失,本试验建立了一种快速诊断和检测“鸭肿头败血症”的间接夹心ELISA方法。 以本实验室分离并鉴定的鸭肿头败血症病毒株XD株为抗原,提纯后免疫鸭、兔,制备的高免血清用“正辛酸—硫酸铵提纯法(CA-AS)”,获得纯化的鸭抗XD病毒IgG和兔抗XD病毒IgG,建立了检测鸭肿头败血症病毒抗原的间接夹心ELISA法。经反复筛选,确定其最佳工作条件为:包被用鸭抗XD病毒IgG浓度为8ug/ml,包被温度和时间分别为37℃1.5h,封闭液为0.5%明胶,封闭条件为37℃1.5h,抗原孵育条件为37℃1.5h,兔抗XD病毒IgG浓度为5ug/ml,孵育条件为37℃2h,酶标羊抗兔抗体浓度为1:2000,孵育条件为37℃2h,底物作用时间为30min,洗涤液(保温液)为0.02mol/L PH7.2 PBS(含0.15mol/L NaCl,0.05%土温-20),保温液为洗液加5%牛血清。阴阳性结果判定的临界OD值为0.412。重复性试验结果:3份阳性样品变异系数为2.0～3.5%,3份阴性样品变异系数为4.6～9.0%,小于规定的板内变异系数10%的范围。 建立的间接夹心ELISA法具有高度特异性,不与鸭肿头败血症阴性抗原、鸭大肠杆菌抗原、鸭瘟、鸭肝炎病毒抗原呈现交叉反应。 建立的间接夹心ELISA法,具有高度敏感性,其敏感性比琼脂扩散实验高1280倍,包被后的酶标板洗涤后在4℃保存,至少可以保存3周。 用间接夹心ELISA法检测实验病死鸭各组织器官中鸭肿头败血症病毒,以心、肝、肺、肾检出率最高,达100%:脑、脾和胰次之,分别为90%、80%、40%。