杜鹃花属植物的RAPD标记研究

【摘要】：本研究对RAPD-PCR的反应体系进行了优化,并利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对24种杜鹃花属(Rhododendron)植物进行基因组多态性分析。共筛选了60个随机引物,其中4个随机引物的扩增产物多态性明显,获得清晰重复性好的条带。在NTSYS-pc软件中,统计扩增产物条带数,用来计算Jaccard遗传相似系数和遗传距离,建立UMPGA聚类分析图。结果表明: 1.获得较好的反应程序和反应体系为: 反应程序为:95℃预变性1min;94℃变性1min;34℃退火1min;72℃延伸2min;45个循环;72℃延伸5min;4℃保存。 反应体系(20μl反应体系)为:模板DNA(10ng/μl)1.5μl;10×PCR buffer2μl;Taq酶(0.5U/μl)0.3μl;Primer(0.8Pmol/μl)4μl;MgCl_2(25 mmol/L)1.8μl;dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.0Nmol/μl)0.6μl。 2.随机引物P15、U7、U10和X3四个引物对24种杜鹃花属(Rhododendron L.)植物扩增的条带在10～15之间,多态性条带在9～14条之间,平均每条引物扩增出12条带;引物U10是扩增出多态性最多的引物,多态性占93.33%。 3.用4个随机引物对24种杜鹃花属植物进行RAPD扩增,所得产物显示了丰富的多态性,表明杜鹃花属植物种间遗传基础相当复杂;对RAPD产物进行统计的相似系数分析和聚类分析结果同形态分类学基本吻合,说明RAPD技术在杜鹃花属植物种间划分和鉴定上有很高的灵敏性和准确性。总的来说,利用RAPD技术可以为杜鹃花属植物的系统演化和划分研究提供帮助。