收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

小鼠胚胎冷冻保存的研究

杨兴东  
【摘要】:本研究采用程序冷冻、直接冷冻、玻璃化冷冻和开放式拉管法(OPS)法对小鼠桑葚胚和早期囊胚进行了冷冻保存,探讨了不同冷冻方法对胚胎存活率的影响,并从冷冻保护剂、植冰温度等不同角度加以研究,以胚胎冷冻后的体外培养和移植来鉴定其冷冻效果。 结果表明:1.将6~8周龄的昆明种雌鼠15只随机分为三组,分别用PMSG和HCG以不同的处理剂量(5IU,10IU,15IU)进行超排处理,每只平均获得胚胎数分别为16.2、23.2和19.0枚,正常胚数分别为12.6、18.8和13.4枚,正常胚的比率分别为:77.78%、81.03%和70.53%,均达到了超排效果。结果表明10IU的处理剂量的超排效果较好(p>0.05)。2.将超排获得的桑葚胚和早期囊胚随机分为(1)20%乙二醇(EG)+20%DMSO处理30秒,再经0.3M蔗糖处理1 min;(2)20%甘油(Gly)+20%1,2—丙二醇(1,2-Pro)处理30秒,再经0.3M蔗糖(Suc)处理1min;(3)经0.3M蔗糖处理(解冻液处理组)1 min;(4)不经任何冷冻液和解冻液处理(对照组)四组。分别24h培养表明:扩张囊胚率为91.23%、80.65%、89.58%和90.74%;48h后的孵化率为64.91%、51.61%、83.33%和85.19%。(1)和(2)组间差异不显著,二者与(3)和(4)相比,差异均显著(p<0.01)。3.分别用F1、F2和F3三种冷冻保护剂,行常规程序冷冻方法冷冻,解冻后培养结果表明:扩张囊胚率分别为78.18%、73.58%和57.14%;孵化囊胚率为45.45%、41.51%和26.53%,F1和F2显著高于F3(p<0.05)。4.将获得的桑葚胚和早期囊胚放入冷冻液F1中平衡5min,冷冻室内停留2min后植冰,再行程序冷冻。证明:-5.5℃、-6.0℃、-6.5℃植冰时,胚胎解冻后体外囊胚孵化率分别为40.38%、45.45%、12.50%,-5.5℃和-6.0℃组的显著高于-6.5℃组(p<0.01)。5.分别用程序冷冻、常规玻璃化冷冻、OPS、直接冷冻法对小鼠桑葚胚进行冷冻保存。解冻后存活率分别为78.18%、70.37%、81.36%和44.92%;48h后的孵化率分别为45.45%、44.44%、50.85%和27.54%。前三种方法组间差异不显著,但直接冷冻法和其他各组相比差异极显著(p<0.01)。6.将上述四种方法冷冻保存的83、68、75和71枚胚胎解冻后分别移植给8、6、6和6只受体,平均每只10~13枚,结果表明:妊娠率为12.5%(1/8)、16.67%(1/6)、16.67%(1/6)和16.67%(1/6)。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 杨秀兰;苏玉虹;巴彩凤;;胚胎冷冻技术及其在转基因小鼠中的应用[J];长江大学学报(自科版)医学卷;2006年05期
2 杨秀兰;苏玉虹;巴彩凤;;胚胎冷冻技术及其在转基因小鼠中的应用[J];长江大学学报(自科版)农学卷;2006年02期
3 金鹰;王达珍;;关于小鼠显微注射体外受精及受精卵体外发育和移植的研究[J];内蒙古大学学报(自然科学版);1993年01期
4 万旭英;朱玉平;马玺里;朱江波;侯娟;刘真;王飞;张天宝;;小鼠腔前卵泡体外培养方法的建立[J];卫生研究;2009年02期
5 舒丹毅;唐军民;唐岩;李枫;;巨噬细胞条件培养液对原代培养小鼠成肌细胞生长的影响[J];解剖学报;2007年03期
6 赵承军;唐军民;唐岩;李枫;田利明;沙印林;;量子点体外对小鼠腹腔巨噬细胞细胞化学的影响[J];解剖学报;2007年04期
7 刘晓萍,高英茂,邴鲁军;小鼠胚芽干细胞的分离与培养[J];山东大学学报(医学版);2005年07期
8 王达珍;张肇英;李昱;郭继彤;李雪峰;;胚胎分割,分割胚的体外发育和移植[J];内蒙古大学学报(自然科学版);1991年02期
9 白琴华;小鼠8细胞期胚胎超低温(—196℃)冷冻保存[J];遗传;1987年01期
10 刘欣;梁洋;张丽新;安铁洙;;4℃保存的小鼠胎体皮肤成纤维细胞继代培养及冻存[J];黑龙江畜牧兽医;2007年05期
11 周生来;董婉维;郑志红;杨葳;张梅英;史晓萍;王禄增;;胚胎冷冻技术应用于抗菌肽转基因小鼠的保种传代[J];中国比较医学杂志;2007年08期
12 李秀伟;吴通义;侯云鹏;周光斌;朱士恩;;小鼠卵母细胞的OPS法玻璃化冷冻保存技术[J];中国比较医学杂志;2006年03期
13 许伍霞;薛立群;;早期胚胎玻璃化冷冻保存技术研究进展[J];北京教育学院学报(自然科学版);2006年02期
14 陆晔,唐一岷,刘丽均,谢恩,薛智谋,徐平;昆明小鼠精子冷冻的研究(简报)[J];实验生物学报;2004年01期
15 林戈,陆长富,龚斐,肖红梅,周虹,卢光琇;人类胚胎超快速冷冻保存的初步研究[J];中华妇产科杂志;2001年12期
16 刘春霞;周欢敏;;马皮肤成纤维细胞的体外培养与冷冻保存[J];中国畜牧兽医;2007年03期
17 尹海林;小鼠左右子宫胚胎移植后怀胎率的差异[J];中国实验动物学杂志;1995年03期
18 王达珍;张肇英;李昱;郭继彤;李雪峰;;胚胎分割、分割胚的体外培养及移植[J];内蒙古大学学报(自然科学版);1990年04期
19 尹海林,张晓彬,张莹,徐君;;玻璃化法冷冻小鼠胚胎[J];实验动物科学;1993年04期
20 黄馨;秦川;;小鼠胚胎冷冻保存技术研究进展[J];中国比较医学杂志;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙正怡;何方方;郁琦;邓成艳;;玻璃化冷冻保存技术在人类囊胚冷冻保存中的应用——117例复苏周期结局分析[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
2 王新庄;张琦;丁向彬;王居强;牛晖;;蓝白花肉牛皮肤成纤维细胞分离培养及冷冻保存的研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
3 熊晓云;邹永;吴玉梅;朱杰;梅其炳;;三种阿尔茨海默症治疗药物促体外培养小鼠皮层神经元活性的比较[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
4 宋国华;刘田福;;动物胚胎玻璃化冷冻保存技术及其研究进展[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
5 江楠;常永富;王丽萍;付伟平;张红霞;;减少移植胚胎数量对冻融胚胎移植结局影响的初步研究[A];2009中国杭州生殖健康学术论坛暨浙江省计划生育学与生殖医学分会学术年会论文汇编[C];2009年
6 唐佳;潘南楠;李骏;李标文;冷静;;LPSp对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响[A];中南地区第六届生理学学术会议论文摘要汇编[C];2004年
7 施巧婷;刘贤侠;徐照学;;哺乳动物胚胎冷冻的超微结构研究进展[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
8 梁洋;杜文敬;王春生;朴善花;安铁洙;;小鼠早期胚胎的EFS20/40、EFS40、DAP213和GP25玻璃化法冷冻保存[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
9 戴国;朱文彪;汪保和;;AcSDKP抑制体外培养条件下人骨髓间充质干细胞的增殖及作用机理研究[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
10 詹华强;蔡智仁;刘大伟;张颖娴;郑玉忠;朱悦;毕文川;詹雅娴;郭江扬;徐丽;付强;张倩;董婷霞;;中药黄酮对体外培养的神经细胞具有神经保护功效——预防老年痴呆症的健康食品滋补剂的研发(摘要)[A];全国第9届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李莲军;小鼠精原细胞体外长期存活及增殖研究[D];中国人民解放军军需大学;2002年
2 马所峰;不借助于显微操作仪的小鼠体细胞核移植技术研究[D];山东农业大学;2005年
3 冯秋婷;PDK1在小鼠心血管发育过程中的作用和机制研究[D];南京医科大学;2011年
4 张学明;小鼠精原干细胞培养体系的优化及体外基因转移[D];吉林大学;2005年
5 孙丽君;家兔卵巢组织冷冻保存、体外培养及移植的研究[D];华中科技大学;2007年
6 彭南妮;卵巢异性移植小鼠两性配子同体发育、受精及胚胎发育研究[D];湖南农业大学;2009年
7 吴国利;奶牛胚胎移植技术对比研究和生产体系建立[D];中国农业大学;2005年
8 马宁;小鼠神经行为测试组合建立及邻苯二甲酸二异丁酯对小鼠学习记忆影响的研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年
9 刘琰;五羟色胺对小鼠社会行为的影响[D];北京协和医学院;2008年
10 王芳;应激和丰富环境及1-脱氧野尻霉素对小鼠衰老相关行为改变的影响[D];安徽医科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨兴东;小鼠胚胎冷冻保存的研究[D];四川农业大学;2006年
2 李玉芳;鹌鹑体外受精和胚胎移植的研究[D];福建农林大学;2006年
3 高善颂;小鼠胚胎分割和分割胚体外培养的研究[D];西南大学;2006年
4 常娟娟;小鼠卵巢组织的玻璃化冷冻保存技术研究[D];福建医科大学;2009年
5 雷晓华;小鼠2,4细胞期胚胎冷冻及冻后发育的研究[D];西北农林科技大学;2008年
6 吴东军;玻璃化冷冻保存对大鼠胰岛细胞的影响[D];山西医科大学;2008年
7 王淑平;骨形态发生蛋白-4对人卵巢组织玻璃化冷冻卵泡作用的实验研究[D];广州医学院;2009年
8 黄馨;不同冷冻方法建立小鼠胚胎库的研究与应用[D];中国协和医科大学;2006年
9 丁月红;IL-1β对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响[D];昆明医学院;2004年
10 刘洁;小鼠4细胞胚胎密闭培养体系的建立及胚胎密闭培养条件筛选研究[D];西北农林科技大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 赵建平;影响牛胚胎移植成功率的因素[N];河南科技报;2005年
2 记者 阎芝莉;幼畜超排让优种快繁梦想成真[N];河北科技报;2006年
3 记者 黄建敏 通讯员 蒋贵运 唐维;全州县第一头胚胎移植牛诞生[N];桂林日报;2005年
4 本报实习 生金平 本报记者 张咏晴;“乙肝小鼠”成人类替身[N];文汇报;2005年
5 云南省家畜改良工作站 赵开典;牛繁殖新技术[N];云南科技报;2007年
6 奇 云;单亲小鼠可能打开潘多拉魔盒[N];大众科技报;2004年
7 刘忠琛 尹怀磊 刘洪江;羊胚胎移植的实用操作技术[N];中国畜牧兽医报;2006年
8 记者 冯金莲;首批性别鉴定胚胎移植犊牛诞生[N];石家庄日报;2006年
9 记者 刘恕 刘霞;利用皮肤细胞培育出健康小鼠[N];科技日报;2009年
10 何德功;小鼠实验证明小脑严重缺乏亦能存活[N];医药经济报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978