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23个油橄榄品种的RAPD分析

邱源  
【摘要】: 本研究采用RAPD技术对23个引种的油橄榄品种进行分类和鉴定研究。首先针对油橄榄基因组DNA的提取改良基因组DNA的提取方法,以获得较高质量的油橄榄基因组DNA用于RAPD分析。然后对油橄榄RAPD反应体系体系进行优化,以建立最佳RAPD扩增体系,筛选出适合油橄榄RAPD分析的引物对样品DNA进行PCR扩增。对样品的RAPD图谱进行分析,获得各样品的RAPD分子特征,最后统计和分析数据,同时对样品间的亲缘关系进行分析和讨论。研究结果如下: (1)本研究采用改良CTAB法,分别从新鲜和硅胶保存的油橄榄嫩叶中提取DNA,与其他部位提取效果相比量大,纯度高、褐化程度低;得到的DNA产率达到194—352ng/mg,OD_(260)/OD_(280)为1.82—2.08。通过琼脂糖凝胶电泳分析,DNA完整性较好,达到RAPD试验的要求。 (2)建立了油橄榄RAPD最佳反应体系:PCR扩增的总体积为20μL,包括40ng的模板DNA,10×PCR buffer 2μL,1.5mmol/L MgCl_2,0.2mmol/L dNTP,0.25μmol/L引物,Taq酶1U。扩增程序为:94℃预变性2min,94℃变性45s,36℃退火1min,72℃2min,40个循环后在72℃延伸4min,结束后在4℃条件下保存。最后用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物。 (3)采用优化后的反应体系对80个引物进行筛选,经过三次重复,筛选出多态性和扩增重复性好、谱带清晰且较多的11个引物,用于油橄榄全部DNA样品的RAPD分析。 (4)应用筛选出11个引物进行扩增,共产生127条带,其中78条为多态性带,占61.4%,平均每个引物扩增的DNA带数为11.55条,多态性DNA的带数为7.09条。扩增出的DNA片段在300—2000 bp之间,其中尤以500—1200 bp之间最多。根据扩增结果建立了品种间亲缘关系的UPGMA聚类图,将23个品种可划分为2大类。 (5)对23个油橄榄品种的分子特征进行了分析,获得了4个品种的RAPD特异标记即阿维金娜在S_(1011)—600bp、小果卡林在S_(1019)—1400bp和S_(1025)—2400bp、佛奥在S_(1025)—400bp以及科拉蒂娜在S_(1011)—650bp分别有各自的特异带。


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