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太湖猪成纤维细胞系和前脂肪细胞系的建立及前脂肪细胞的分化研究

张利娟  
【摘要】: 本实验以太湖猪为研究对象,采用组织块法培养成纤维细胞系,胶原蛋白酶消化法培养前脂肪细胞系,并对所建细胞系进行了鉴定,包括细胞形态观察、冻存前和复苏后接种的存活率测定、生长曲线绘制、染色体核型分析等一系列的生物学特性分析。此外,采用50nmol/L胰岛素、100 nmol/L地塞米松、100 nmol/L罗格列酮和0.25 mmol/L 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤分化诱导已建立的前脂肪细胞,观察其形态学变化,用油红O染色法进行定性检测,并通过测定OD值确定诱导过程中细胞甘油三酯的变化情况。得到结果如下: 1.成纤维细胞呈梭形或不规则三角形,细胞先沿组织块周围生长,随后向外伸展形成生长晕,传代细胞与原代细胞在形态上无明显差异。前脂肪细胞接种3~6h后开始贴壁,为典型的成纤维细胞样。 2.成纤维细胞冻存前和复苏后接种的存活率分别为96.5%和93.2%,前脂肪细胞分别为95.4%和92.3%。 3.成纤维细胞和前脂肪细胞的群体倍增时间均为72h,在体外的生长增殖趋势呈“S”型,经历了潜伏期、指数增生期和停滞期三个阶段,符合细胞在体外生长的一般规律。 4.对成纤维细胞和前脂肪细胞进行染色体分析得出:2n=38,XY,为稳定的二倍体细胞系,不存在种间的交叉污染。 5.诱导分化过程中,第3d即可观察到小脂滴,第4d有多个小脂滴,随着分化进行大多数胞浆中的小脂滴聚集成葡萄串状,细胞变成椭圆形或者圆形。大部分前脂肪细胞在第9~10d均成功的分化成为成熟的脂肪细胞,用油红O染色呈红色。 6.细胞内脂肪含量测定与分化过程中细胞形态变化情况吻合。 综上所述,以上各项指标都符合细胞建系的要求,成功的构建出了太湖猪的成纤维细胞系和前脂肪细胞系,并诱导分化出成熟的脂肪细胞。


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