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熊猫足螨副肌球蛋白基因的克隆与原核表达

严慧娟  
【摘要】: 足螨是家畜和野生动物常见的一类体外寄生虫,呈世界性分布,可引起宿主动物发生顽固性、接触传染性皮肤病。大熊猫是我国的国宝,熊猫足螨病是大熊猫常见的体外寄生虫病,对大熊猫的危害极大。长期以来,动物足螨病的防治均以药物杀螨为主,但杀螨药物均不同程度地存在副作用且长期使用可能产生抗药性以及造成环境污染等问题,因此需要进行防治新技术的研究。目前有关动物足螨病的免疫防治,尚无研究报道。本研究从大熊猫体表采集分离出熊猫足螨,参考GenBank中收录的德州足螨副肌球蛋白基因和绵羊痒螨副肌球蛋白基因序列设计引物,通过PCR扩增与克隆后测序得到了2628bp的副肌球蛋白全基因序列(登录号为EU543652)。通过对该基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行分析,结果表明熊猫足螨副肌球蛋白基因核苷酸序列与德州足螨和绵羊痒螨序列同源性最高,分别为98.4%和95.9%,其次与欧洲尘螨分离株的同源性较高为90.8%,与疥螨的序列同源性范围为81.3%~84.3%,而与美洲尘螨分离株部分序列同源性较低仅为71.1%;而它们的氨基酸序列的同源性较高,均在95%以上,其中与德州足螨和绵羊痒螨的同源性最高,分别达到99.8%和98.6%。该基因编码了一个有875个氨基酸的多肽,该蛋白分子量为102.581kDa,理论等电点值为pI=5.57,具有较强的亲水性,蛋白抗原性分析显示其抗原位点分布于整个蛋白质多肽链,有40个T淋巴细胞抗原决定簇位点,不存在跨膜结构域,是一种膜外蛋白。 将目的片断插入pET32a(+)表达载体上,并将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1.0mM/L的IPTG诱导表达了熊猫足螨副肌球蛋白,SDS—PAGE分析表明,在相对分子质量约122kDa处有明显的蛋白质表达条带,该蛋白在7h时基本达到表达量最大值,而IPTG浓度在0.5mM/L、1.0mM/L和2.0mM/L之间没有明显表达差异,均都得到了很好的表达。同时采用兔疥螨阳性血清为一抗进行免疫印迹反应,结果发现重组载体菌表达产物可与兔疥螨阳性血清反应出现蛋白免疫印迹带,由此说明该蛋白与兔疥螨副肌球蛋白为同源蛋白,具有交叉反应。


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12 朱本仁;;大熊猫饲养初探[J];野生动物;1985年06期
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14 甘平;大熊猫的迁地保护[J];科学中国人;1998年08期
15 汪永晨;大熊猫是外国人发现的[J];市场观察;2001年01期
16 阿新;;紧急拯救大熊猫[J];绿叶;2003年03期
17 陈能文;曾祥元;;大熊猫生殖探索人[J];中国西部;2003年02期
18 ;科学家发现大熊猫秦岭亚种[J];陕西林业;2005年S1期
19 温雅莉;;大熊猫国内借展管理规定九月一日施行[J];中国林业;2011年16期
20 胡锦矗;;今昔大熊猫[J];野生动物;1981年01期
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1 张美佳;张志和;侯蓉;张安居;何光昕;李光汉;王基山;李绍昌;余建秋;李学兵;宋云芳;陈红卫;刘选珍;杨智;黄祥明;王强;;大熊猫卵巢中“连体卵”的发现及其分离[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
2 范志勇;长有德;;大熊猫未来长期保护策略研究[A];第七届全国野生动物生态与资源保护学术研讨会论文摘要集[C];2011年
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5 陈玉村;;保护大熊猫及期待解决的问题[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
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7 方盛国;朱睦元;李建国;张黎明;欧维富;鲜方海;陈万里;;唐家河自然保护区大熊猫数量及家系结构确认研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(上册)[C];1999年
8 陈玉村;;大熊猫保护与研究亟待解决的问题[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
9 蔡志刚;侯蓉;刘玉良;王海瑞;;大熊猫LH酶联免疫检测的初步研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
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1 本报记者 于成龙;保护大熊猫立法纳入进程[N];华夏时报;2003年
2 记者 吴鹤年;福州大熊猫研究多项成果国际领先[N];科技日报;2000年
3 李广龙;我国首只境外出生的大熊猫返乡[N];中国绿色时报;2004年
4 记者 于青 管克江;大熊猫“童童”患病死亡[N];人民日报;2000年
5 ;大熊猫本来命不该绝 人类的干扰使其濒危[N];人民日报海外版;2001年
6 记者 周其俊;大熊猫将走向何方[N];文汇报;2003年
7 本报记者 李丹;保护战略敲定:给国宝更大“领地”[N];四川日报;2008年
8 本报通讯员 赵建强 吴燕峰;秦岭大熊猫冬日生活悠然自得[N];陕西日报;2009年
9 刘伟 郭晶晶;网友曝光熊猫在深圳受虐待[N];西部时报;2009年
10 苏智 本报记者 姚永亮 李成;生态瓦屋山真有“国宝”大熊猫[N];眉山日报;2009年
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