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黄鳝出血病病原菌的分离、鉴定和组织病理学观察

何智  
【摘要】: 黄鳝是我国极具价值的名特优经济鱼类之一,是深受国内外消费者喜爱的美味佳肴和滋补保健食品,具有较大的市场价值和开发潜力。2007年5~6月,四川某黄鳝养殖场爆发黄鳝出血病。患病黄鳝死亡前浮在水草上,行动迟缓,体表可见出血斑,肛门红肿,肠内无食物,有的肠壁出血,发病黄鳝在1~2d内死亡,发病快、传染性强。四川是我国黄鳝主产区之一,养殖黄鳝常爆发出血病,给养殖户造成很大的经济损失。本试验对四川黄鳝出血病病例的病原学和病理学等相关方面进行了研究,旨在弄清该病的病原菌与致病机理等,为养殖生产上该病的诊断和防治提供科学依据。 从自然发病黄鳝的肝、肾和脾中分离到致病菌株(jy1),经人工感染后出现与自然病例相似的症状,证实其为黄鳝出血病的病原菌。同时,鲤鱼和泥鳅腹腔注射该菌后能引起二者死亡。分离菌株在普通肉汤和TSB中均能生长,在普通肉汤的管底形成絮状沉淀,表面形成一层较厚一摇即破的菌膜;在普通营养琼脂平板上可见呈圆形、边缘整齐、中央隆起、表面光滑、灰白色、半透明状的菌落。经形态特征观察和生理生化特性检测表明:该菌为兼性厌氧,革兰氏阴性短杆菌,极生单鞭毛,具运动力,无芽孢,无荚膜;能发酵葡萄糖,利用葡萄糖产气,阿拉伯糖产酸;硫化氢、麦芽糖、氰化钾、氧化酶、精氨酸双水解酶、氧化酶、接触酶和V-P反应等为阳性反应;尿素反应阴性。以该菌的16S rRNA序列通过NCBI的Blast检索系统进行同源性比对表明其与嗜水气单胞菌的同源性达99%;在构建的系统发育树中,分离菌株与其他嗜水气单胞菌形成一个簇群,置信度达99%。根据其形态特征和生理生化特性,并结合16S rRNA序列的分析结果将其鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。 分离菌株对21种药物的敏感试验结果表明:该菌株对头孢他啶、壮观霉素、萘啶酸、磺胺异嗯唑、洛美沙星、丙氟哌酸、头孢氨噻肟等9种药物高度敏感;对四环素、卡拉霉素、红霉素、利福平、呋喃妥因等7种中度敏感;对头孢拉定、头孢氨苄、氨苄青霉素、甲氧苄啶等5种药物不敏感。 对黄鳝人工感染分离菌株后的临床症状和动态病理变化进行了观察。感染黄鳝的临床症状与自然发病症状相似,感染后15~33h为死亡的高峰期。感染后9h开始出现明显的临床症状,如肛门红肿等;感染后15h身体出现扭转,开始出现死亡,腹部隐约可见出血斑;感染后18h黄鳝体表和腹部两侧出现出血斑,肛门外翻,死亡个体口腔有红色粘液。分离菌株感染黄鳝后的组织病理变化表现为全身实质性器官出血和广泛的组织细胞变性、坏死为主。感染后3h以肾的变化较为明显,出现肾小管上皮肿胀,肾间质有出血。肝在感染后12~15h出现空泡变性,核大量浓缩;21~27h大量肾上皮崩解,肾小管结构消失,肝广泛性出血,空泡变性严重。33~39h肾小球变性坏死,肝细胞部分结构紊乱,大量肝细胞坏死。


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