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独活杀灭鱼类指环虫活性成分的研究

姚璐  
【摘要】: 鱼类指环虫病是一种鱼类养殖中最常见寄生虫病害之一,流行于春末夏初。此病流行广、传播快、危害大,且其发病率和危害性正在逐年增长。国内外对于此病的防治主要是移植人药、兽药和部分农药等化学药物,但长期使用,会造成环境污染、药物残留、耐药性等一系列问题。因此,需寻找新的对环境无污染、易降解的天然植物杀虫药,以及从天然植物中分离杀虫活性成分,进而进行仿生合成,更符合人类对健康的要求。同时,也有利于植物资源的合理利用和开发。 1.本研究以此为出发点开展了杀虫活性植物筛选、活性部位筛选、杀虫活性成分跟踪分离、鉴定。在20种植物中,对指环虫的最高杀灭率依次为:独活为100%:除虫菊为90%;远志、了哥王、苦树皮为80%;走马芹、半边莲、吐根、委陵菜为50%;南天竺、延胡索、藜芦、断肠草、白屈菜、血水草为20%~30%;在1000 mg.L~(-1)范围内,八角枫、山麻柳、千里光、水黄连、瓜蒌没有明显杀虫活性。最佳杀虫浓度从低到高依次为:了哥王为30 mg.L~(-1);独活为120 mg.L~(-1);白屈菜为150 mg.L~(-1);走马芹为200mg.L~(-1);除虫菊为240 mg.L~(-1):远志为350 mg.L~(-1);藜芦为400 mg.L~(-1);苦树皮为500 mg.L~(-1);延胡索为600 mg.L~(-1):南天竺为700 mg.L~(-1);血水草、断肠草、半边莲、吐根为800 mg.L~(-1)。在测试浓度范围内,能够导致试验金鱼在48 h死亡的如表2-2所示,其中山麻柳;瓜蒌、断肠草、半边莲、吐根、委陵菜在1000 mg.L~(-1)时,试验金鱼仍然未见有死亡现象。 2.独活杀灭指环虫活性部位的研究:分别采用4种极性不同的溶剂对独活进行提取,并测定不同溶剂提取物的杀指环虫活性。结果显示:乙醇提取物的最佳杀虫浓度为120mg.L~(-1)(按生药计),杀虫率为100%;丙酮提取物最佳杀虫浓度为70 mg.L~(-1)(按生药计),但最高杀虫率为72.0%;乙酸乙酯提取物的最佳杀虫浓度为300 mg.L~(-1)(按生药计),最高杀虫率只有64.8%;而石油醚提取物的最佳杀虫浓度为100 mg.L~(-1)(按生药计),最高杀虫率仅为49.1%。 3.独活中杀灭指环虫活性成分的跟踪分离与结构鉴定:根据2可知乙醇提取物对指环虫具有杀灭效果。采用硅胶柱层析法,以石油醚-乙酸乙酯(40:1、30:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1),乙酸乙酯-甲醇(100:1、50:1、20:1、10:1、5:1、3:1、2:1、1:1、0:1和水洗柱)作为洗脱系统,进行梯度洗脱,TLC检测,得到16个流分组A~P,经药效测定F流分和K流分组具有杀虫活性,且F流分为结晶体,TLC检测为单点。以氯仿-甲醇(50:1,25:1,10:1,9:1,8:1,7:1,5:1,3:1,2:1,1:1,甲醇和水洗柱)作为洗脱系统,对K流分组进行硅胶柱层析分离,得到11个流分组K_1~K_(11),经药效测定K_1流分组具有杀虫活性。以石油醚-乙酸乙酯(1:0、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1、甲醇)作为洗脱系统,对K_1流分进行硅胶柱层析分离,得到6个流分组K_(1-1)~K_(1-6),其中经药效测定K_(1-1)和K_(1-2)具有杀虫活性,且K_(1-1)为油性成分。以石油醚—氯仿(6:4、6:5、6:6、6:7、氯仿)作为洗脱系统,对K_(1-2)进行梯度洗脱,得到4个流分组K_(1-2-1)~K_(1-2-4),其中K_(1-2-3)具有杀虫活性,且为结晶物质,TLC检测为单点。F和K_(1-2-3)的活性测定结果显示,F 48h的100%杀指环虫浓度为1.6 mg.L~(-1);K_(1-2-3)48h在浓度为5 mg.L~(-1)时,对指环虫的杀灭率为74.4%;K_(1-1)48h在浓度为20 mg.L~(-1)时,对指环虫的杀灭率为51.9%。 通过对活性化合物进行熔点测定,并结合质谱(EI-MS)、红外光谱(IR)、质子核磁共振谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(~(13)C-NMR)、高效液相(HPLC)、气质联用(GC-MS)等对其结构进行鉴定。F鉴定为蛇床子素(C_(15)H_(16)O_4),K_(1-2-3)鉴定为东莨菪内酯(C_(10)H_8O_4),K_(1-1)鉴定为油性成分。


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