毛蕊铁线莲组织培养与植株再生研究

【摘要】： 本研究以毛蕊铁线莲(Clematis lasiandra Maxim.)当年生幼嫩枝条的带芽茎段、节间、叶片为试验材料,通过正交试验设计结合方差分析,探讨了毛蕊铁线莲离体培养的关键影响因素,存在问题及解决方法,对毛蕊铁线莲无菌苗诱导、愈伤组织诱导及分化、愈伤组织防褐化方法、壮苗生根、炼苗与移栽等方面进行了研究,以得到最佳培养配方及培养程序,从而为建立毛蕊铁线莲的快繁体系、工厂化生产提供理论与技术依据。 通过组织培养技术研究得出： ①毛蕊铁线莲外植体组织培养最佳取材时间为3月,启动率高,污染率低。带芽茎段、节间和叶片启动率分别为81.67%、66.67%和75.00%,污染率分别为15.00%、22.03%和13.33%。 ②毛蕊铁线莲用0.1%的Hgcl2灭菌时间带芽茎段为5min,节间为5min,叶片为3min。 ③初代培养：带芽茎段培养基以MS+6-BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1为最适培养基配方,启动率高达90.56%,出芽指数1.75；节间愈伤诱导培养以MS+6-BA2.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1为最适宜培养基配方,出愈率83.30%；叶片愈伤诱导培养以MS+6-BA 0.50 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1+2,4-D 0.10 mg·L-1为最适宜培养基配方,出愈率80.30%。 ④继代培养：适宜于带芽茎段不定芽增殖培养的最优组合是MS+6-BA 1.00mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1,30d后增殖倍数达3.2；适宜于愈伤组织继代增殖培养的最优组合是MS+6-BA 2.00 mg·L-1+NAA0.10 mg·L-1+2,4-D 0.01 mg·L-1,增殖率为24.45%；适宜于愈伤组织分化培养的最优组合是MS+6-BA 2.00 mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1,分化率为36.67%。 ⑤愈伤组织防褐化：MS+6-BA2.00 mg·L-1+NAA0.10mg·L-1+2,4-D 0.01mg·L-1+ PVP 2g·L-1较好,褐化率仅为30.43%。 ⑥有效苗的培养：以MS+蔗糖40g·L-1为最适宜培养基配方组合,植株生长健壮,有效苗率为65.21%。 ⑦生根培养：以1/4MS+NAA 0.50 mg·L-1+AC 1.00 g·L-1+蔗糖15 g·L-1为最适宜培养基配方组合,植株生长健壮,生根率最高,达86.10%,平均根数4.3条。 ⑧炼苗与移栽：移栽基质以珍珠岩、蛭石、腐殖土以1：1：2的比例效果最好,成活率为75%。