中江丹参连作土壤微生物特性研究

【摘要】： 从四川省中江石泉乡丹参GMP示范基地采集患病丹参根际(HD1)和非根际土壤(HD2),正常生长丹参根际(CK1)和非根际土壤(CK2)土样,测定了供试土样的微生物类群数量、微生物量碳、氮以及土壤酶活性。用稀释平板法分离获得46株细菌,采用BOXAIR-PCR、16S rDNA PCR-RFLP、16S rRNA基因全序列分析,研究了供试细菌的遗传多样性,初步确定了代表菌株的系统发育及分类地位。同时,利用PCR-DGGE技术分析了供试土样的微生物多样性。结果如下： (1)中江丹参种植土壤根际与非根际土壤中微生物数量差异较大。细菌数量最多,放线菌其次,真菌最少。 (2)从中江丹参种植土壤中分离获得了46株细菌,其中,G+占有相当的优势,共有25株,G-共有21株。其中G+细菌中芽孢杆菌为优势菌群。 (3)土壤微生物量的测定结果表明,正常生长丹参的土壤(CK1)根际微生物量碳、氮比患病丹参土壤(HD1)的高出32.4%和64%,而非根际土壤(CK2和HD2)差别不明显。 (4)从土壤酶活性看,患病丹参根际土壤(HD1),其酶活比对照土壤(CK1)低,其中,ALP降低53.3%,URE降低38.5%,CAT降低11.1%。说明患病丹参可降低其根际土壤的酶活性。 (5)遗传多样性分析结果表明,丹参种植土壤细菌存在着丰富的遗传多样性。BOXAIR-PCR将46株细菌被分为7个遗传群；在16S rDNA PCR-RFLP中,这些菌株在79%的水平处被分为7个遗传群。 (6)据16S rRNA基因全序列构建的系统发育树,确定了12个代表菌株的系统发育地位和分类地位,它们分属于芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、短杆菌属(Brevibacterium)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、Lysinibacillus属。 (7)在PCR-DGGE分析中,不同样品之间条带差异明显,多样性指数差别较大。而在连作患病丹参根际发现有球毛壳属Chaetomium(同源性98%),茎点霉属Phoma(同源性99%),此外,还存在大量非培养细菌和真菌。