收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

产酶芽孢杆菌的筛选、鉴定及对肉鸡的微生态效应研究

潘康成  
【摘要】:本文对实验室分离保存的芽孢杆菌进行产酶活性筛选,并对筛选得到的一株产酶 活性高的芽孢杆菌进行序列分析鉴定,研究其对雄性小鼠的生殖系统安全16S rDNA性、采用实时荧光定量检测在肉鸡肠道中消长规律、PCR (RT-qPCR)和ERIC-PCRPCR-DGGE检测肉鸡口服该菌悬液后肠道菌群多样性,然后制成活菌制剂观察其对肉鸡生长性能、肌肉品质、肠道菌群、消化酶活性和免疫功能的影响。结果如下: 1.采用平板培养法对10株芽孢杆菌产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶活性进行初选,然后采用比色法测定芽孢杆菌发酵培养液酶活性进行复选。筛选出产酶活性较高的芽孢杆菌Pab02菌株。根据细菌的16SrDNA序列两端的保守性设计通用引物,提取菌株的基因组DNA,对菌株的16SrDNA的进行PCR扩增,并对扩增得到的目标片段进行测序,将测序结果与NCBI上已知菌种的16SrDNA序列进行同源性比较和构建系统发育进化树进行分析,结合细菌形态特征、生理生化特性,最终确定芽孢杆菌Pab02为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。 2.为了评价该菌的安全性,选用72只昆明系雄性小鼠,随机分成6组。药物对照组,每只小鼠按20 mg/kg体重经口灌喂环磷酰胺,1次/d,连续5d,诱导小鼠产生生殖毒性;药物对照组和空白对照组小鼠饲喂不含任何益生菌和抗生素的日粮,芽孢杆菌Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组分别饲喂含有105,106,107CFU/g和108CFU/g的饲料。饲喂至30d时,每组随机剖杀6只,检测小鼠睾丸、附睾重,精子畸形、精子活力,睾丸组织中MDA含量和SOD活性,精子顶体酶活力,血清睾酮(T)含量,并通过组织切片观察雄性小鼠睾丸的组织结构。结果显示,芽孢杆菌Pab02对小鼠体重、小鼠睾丸和附睾重均有明显的增重效果;芽孢杆菌Pab02可提高小鼠精子活率,对精子畸形的减少没有明显的作用;芽孢杆菌Pab02可降低小鼠翠丸组织中MDA含量,提高睾丸组织中SOD活性、精子顶体酶活力和血清睾酮的含量,芽孢杆菌Pab02对小鼠的睾丸组织结构有一定的改善作用。结果表明,芽孢杆菌Pab02对雄性小鼠是安全的,没有造成生殖毒性,对雄性小鼠生殖功能有一定的促进作用。 3.芽孢杆菌Pab02菌悬液按2ml/kg体重(109CFU/ml)灌喂28日龄的肉鸡,2次/d,连续3d后,收集肠道内容物,采用RT-qPCR检测肠道内容物中芽孢杆菌的数量。结果,对照组(灌喂等量的PBS液)肉鸡肠道内芽孢杆菌数在5.37-6.10logCopies/g之间,当连续口服芽孢杆菌Pab02菌悬液后,十二指肠内的芽孢杆菌数量从12h到第4d显著高于对照组,第5d后恢复到对照组水平;空肠、回肠和直肠从12h到第5d显著高于对照组,第6d后恢复到对照组水平。盲肠内的芽孢杆菌数量在36h和60h时显著高于对照组。结果表明,芽孢杆菌在对照组肉鸡肠道中的数量较少,芽孢杆菌Pab02作为微生态制剂饲喂动物,须长期投服或间断时间不超过3d。 4.芽孢杆菌Pab02菌悬液连续灌喂28日龄肉仔鸡3d后(2次/d),收集停喂3d的肠道内容物,采用ERIC-PCR/PCR-DGGE方法分析电泳指纹图谱条带数及相似性指数,以及对DGGE特异性条带回收、测序分析其肠道菌群。结果显示,两种方法都证明肉鸡口服芽孢杆菌Pab02后各肠段的条带数及特征性条带均明显多于对照组,说明芽孢杆菌Pab02具有提高肉鸡肠道菌群多样性和种群密度;通过对电泳指纹图谱条带的聚类分析,两种检测方法显示肉鸡肠道菌群结构的多样性变化规律相似,两组肉鸡肠道细菌之间存在着种群的差异性,但两组之间肠道总菌群的相似性系数为53.2%,存在着较高的相似性,说明该年龄段的肉鸡肠道微生物种群存在着一定的稳定性;尽管两种检测方法检测结果存在着一定的相似性,但从电泳指纹图谱和统计条带数量分析,PCR-DGGE明显优于ERIC-PCR;通过刘DGGE图谱上出现的7条共同条带和8条试验组条带进行回收鉴定,结果表明,肉鸡在4周龄到5周龄的肉鸡肠道中主要以乳酸菌为主要菌群,饲喂芽孢杆菌Pab02后能提高肉鸡肠道菌群的丰度和种群密度。 5.利用芽孢杆菌Pab02制成活菌制剂后饲喂肉鸡,观察其对肉鸡生长性能、肌肉品质、肠道菌群、消化酶活性及免疫功能的影响。空白对照组饲喂基础日粮,抗生素对照组在日粮中添加0.05%的硫酸新霉素制剂,Pab02组在日粮中添加0.1%的芽孢杆菌Pab02制剂。饲喂至6周龄时,与空白对照组相比,芽孢杆菌Pab02提高了肉鸡的末期体重、净增重和日增重(P0.05),但比抗生素组低(P0.05);对采食量和饲料转化率没有影响(P0.05);Pab02组肉鸡胴体品质的各项指标与两对照组相比,显著提高了腿肌率(P0.05),其余各项指标无明显差异(P0.05);Pab02组鸡肌肉中的蛋白含量显著高于两对照组(P0.05);肌肉中的氨基酸总量和鲜味氨基酸含量极显著高于两对照组(P0.01),必须氨基酸量极显著高于抗生素组(P0.01);在6周龄时,芽孢杆菌Pab02可以提高肠道中乳酸菌的数量,减少大肠杆菌和总需氧菌数量,在盲肠段中表现差异显著(P0.05);在4周龄和6周龄时,芽孢杆菌Pab02组肠道淀粉酶和蛋白酶活性均显著或极显著高于两对照组(P0.05或P0.01),芽孢杆菌Pab02可促进免疫器官的发育,提高血清对新城疫病毒的抗体效价,提高6周龄时的血清IgG含量(P0.01)。结果表明该菌制成的微生态制剂可以在肉鸡饲养整个期间替代抗生素添加剂。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 杨国太;;加强肉鸡疾病的预防与治疗措施初探[J];农业开发与装备;2017年12期
2 陈奎忠;;肉鸡常见病的症状及治疗方法[J];中国畜牧兽医文摘;2018年06期
3 小地瓜;;我的“肉鸡”岂容他人放马[J];现代计算机(普及版);2006年01期
4 黄汉志;;浅谈如何养好肉鸡[J];今日畜牧兽医;2018年10期
5 李玉征;;肉鸡地下笼养技术[J];畜牧与兽医;2016年12期
6 ;“2016’河北肉鸡健康养殖与疫病防控实用技术培训会”在河北邯郸召开[J];北方牧业;2016年23期
7 王伟;;肉鸡检疫工作中存在的问题及对策[J];农民致富之友;2016年22期
8 王进;李祥林;梁滋旺;曹积武;;标准化肉鸡笼养技术[J];养禽与禽病防治;2016年07期
9 张荣;;一例肉鸡猝死综合征的诊治体会[J];畜牧兽医科技信息;2017年03期
10 ;肉鸡“福利屠宰”不是矫情[J];湖北畜牧兽医;2016年09期
11 蒋琴;;肉鸡猝死综合征的防治[J];中国动物保健;2017年04期
12 刘国信;;2015年肉鸡行情分析[J];养禽与禽病防治;2016年01期
13 毛世友;;肉鸡感冒的发病特点及防治初探[J];农业开发与装备;2017年07期
14 郭衍冰;曹利利;董航;邵洪泽;苏双;姚新华;;浅谈大安市肉鸡生态养殖现状及发展前景[J];吉林畜牧兽医;2017年09期
15 祁华虎;陈志军;廖智慧;;笼养肉鸡存在的问题和解决方案[J];乡村科技;2017年32期
16 梁跃东;;饲养密度对肉鸡品质的影响[J];畜牧兽医科技信息;2015年11期
17 曾新民;;肉鸡育雏时面临的问题及其解决对策[J];现代畜牧科技;2015年04期
18 ;全国肉鸡苗价格一览[J];北方牧业;2012年05期
19 杜洁茹;;肉鸡苗价格为何持续上扬?[J];北方牧业;2012年05期
20 小琳;;低迷行情下的肉鸡经营[J];农村养殖技术;2012年14期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱俊芬;;肉鸡发病率高的原因分析[A];2009新华杯迎国庆60周年畜牧兽医科技论文集[C];2009年
2 罗志楠;;肉鸡的健康养殖[A];福建省科协第八届学术年会分会场“转变饲养方式,促进海西畜牧业和谐发展”学术年会论文集[C];2008年
3 陈娟;王曼;孔一力;马海田;;丙酮酸、丙酮酸肌酸和肌酸对肉鸡肝脏胞浆蛋白/酶表达谱的影响[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年
4 陈娟;孔一力;王曼;马海田;;丙酮酸、丙酮酸肌酸和肌酸对肉鸡肌肉蛋白/酶表达谱的影响[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年
5 薛红枫;;活菌制剂在肉鸡上的应用试验报告[A];第二届饲料微生态制剂应用技术研讨会暨微生态制剂大会论文集[C];2012年
6 何诚;梁礼成;赵德明;乔健;夏国良;;肉鸡腹水症发病机理研究——Ⅳ.肉鸡和蛋仔鸡左右心室功能的比较研究[A];第四届中国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2001年
7 付双喜;冯定远;;霉菌毒素吸附剂在肉鸡试验中的效果研究[A];第四届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2002年
8 孙勇;王丽平;;黄连素对肉鸡P-gp的mRNA表达和转运的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集[C];2015年
9 何武顺;王永昌;;肉鸡中草药饲料添加剂对小白鼠免疫系统及改善肉鸡肉质试验研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(上册)[C];1999年
10 曾健滢;李英;韩前彪;潘家强;唐兆新;吴玄光;;酶消化法分离培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 潘康成;产酶芽孢杆菌的筛选、鉴定及对肉鸡的微生态效应研究[D];四川农业大学;2009年
2 陈瑞清;肉鸡组织中癸氧喹酯检测方法及残留消除规律的研究[D];福建农林大学;2011年
3 马立才;典型肉鸡生产链中弯曲菌耐药性调查及风险评估研究[D];中国农业大学;2014年
4 Hussain Ahmad;不同硒源饲料对LPS刺激肉鸡的抗氧化能力和免疫功能的影响[D];南京农业大学;2012年
5 孙勇;黄连素对肉鸡P-糖蛋白表达和功能的影响[D];南京农业大学;2015年
6 李昌武;肉种鸡锌营养对子代肉鸡免疫机能的影响及其分子机制[D];中国农业大学;2015年
7 法祖尔(Fazul Nabi);Hsp90抑制剂对福美双诱导的胫骨软骨发育不良肉鸡生长板血管生成的影响[D];华中农业大学;2016年
8 默罕默德 扎德(Muhammad Shahzad);HSP-90抑制对福美双诱导的胫骨软骨发育不良肉鸡生长板细胞外基质降解的影响[D];华中农业大学;2015年
9 李美菊;产蛋白酶工程菌株的构建及其释放DNA的研究[D];武汉大学;2005年
10 雷钊;特异性阿拉伯木聚糖降解酶促进肉鸡肠道乳酸菌增殖的机理研究[D];中国农业大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨明;肉鸡、蛋鸡生产方式转变调研分析[D];山东农业大学;2017年
2 成航;肉鸡、蛋鸡生产方式转变调研分析[D];华南农业大学;2016年
3 王振宇;肉鸡固态复合微生态制剂的研制[D];四川农业大学;2010年
4 张志成;肉鸡钙磷营养需要动态预测模型研究[D];江西农业大学;2012年
5 葛加根;高赖氨酸稻谷在肉鸡饲粮中应用效果的研究[D];扬州大学;2007年
6 周莹;相对湿度对不同偏热处理下肉鸡生理和代谢功能及生产性能的影响[D];中国农业科学院;2017年
7 常钰辉;规模化肉鸡加工企业食品安全控制体系及应用[D];河北工程大学;2016年
8 陈万荣;良种肉鸡在甘肃省推广模式的建立与实施[D];甘肃农业大学;2003年
9 韩秋霞;几株芽孢杆菌肉鸡代谢研究[D];山东师范大学;2005年
10 贾海康;不同磷酸盐对肉鸡的适宜用量研究[D];四川农业大学;2016年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 何佳芮 通讯员 虞璐;“京海黄鸡”提升肉鸡种业核心竞争力[N];江苏科技报;2019年
2 寇宗彦;26日龄肉鸡腹胀后死亡怎么办[N];农业科技报;2019年
3 熊东艳;如何防治肉鸡猝死综合征[N];河北科技报;2017年
4 本报记者 梁高强;小乳瓜小肉鸡让农民腰包鼓起来了[N];咸阳日报;2017年
5 衡水市冀州区农牧局 王永刚 赵雅;肉鸡猝死综合征的预防措施[N];河北科技报;2018年
6 证券时报记者 李曼宁;禾丰牧业:持续推进肉鸡产业化发展[N];证券时报;2018年
7 胡立彪;肉鸡与土鸡[N];中国质量报;2013年
8 山东省沂水县职业学校 李长强;肉鸡猝死为哪般[N];河北科技报;2012年
9 通讯员 马杰 继保;梁山肉鸡肉鸭产业化[N];济宁日报;2010年
10 卫升;肉鸡出栏要注意[N];中国畜牧报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978