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四川省雅江县松茸生长地土壤微生物多样性研究

张俊  
【摘要】: 从四川省雅江县4个不同海拔松茸生长地采集A、B层土壤8份,测定了土壤微生物量碳氮,酸性磷酸酶、脲酶、过氧化氢酶活性,可培养微生物数量;对分离获得的40株纯培养细菌,采用BOXAIR-PCR、16S rDNA PCR-RFLP、16S rRNA基因全序列分析,研究了其遗传多样性和系统发育及分类地位;进而采用PCR-DGGE方法研究了供试土样中细菌、真菌的多样性。其结果如下: 1.供试土样微生物量碳在132.07mg/kg-371.95mg/kg之间,微生物量氮含量在14.15-53.88 mg/kg之间。 2.供试土样酸性磷酸酶含量在0.0938-0.3052 mg·g-1·h-1之间,脲酶含量在0.0586-0.2252 mg·g-1·h-1之间,过氧化氢酶含量为0.0229-0.0355 mg·g-1·h-1。三种酶在土壤剖面中垂直分布有明显的层次性,多随土层加深而递减。 3.供试土样中可培养微生物的数量:细菌为3.13×105 cfu·g-1-3.76×107 cfu·g-1,放线菌为0-3.00×106 cfu·g-1,真菌数量为4.6×104 cfu·g-1-1.40×106 cfu·g-1。分离纯化得到40株纯培养细菌菌株,19株为G+,21株为G-菌株。 4.对40株细菌的BOXAIR-PCR指纹图谱进行了聚类分析结果显示,在65%的相似水平上所有菌株聚在一起,在74%的相似水平上分为6个遗传群;16S rDNA PCR-RFLP聚类分析显示供试菌株在65%相似水平处,被分为G+和G两大类,在74%的相似水平上被划分为7个群。 5.选取了11个纯培养细菌测序,初步明确了其系统发育地位。11个代表菌株分别位于11个系统发育分支上,分属于芽孢杆菌属(Bacillus), Lysinibacillus属,类芽孢杆菌属(Paenibacillus),两面神菌属(Janibacter),枝动菌属(Mycoplana), Collimonas属,贪噬菌属(Variovorax),寡养单胞菌属(Stenotrophomonas),假单胞菌属(Pseudomonas),噬冷杆菌属(Psychrobacter),土地杆菌属(Pedobacter)。 6.对供试土样的细菌总DNA分析得到了清晰的DGGE图谱,多样性丰富。选取10根DGGE条带克隆测序后显示:代表优势菌群中有1个属于放线菌门、2个属于酸杆菌门、2个属于变形菌门,其余5个属于未分类细菌。 7.真菌DGGE图谱条带数目多且亮度很高,不同采样点与不同土壤层次间差异较大。选取了11根条带作为真菌克隆测序对象并建立了系统发育树,结果显示:11个供试菌株分属于8个分支,在供试土样真菌中尤以盘菌亚门真菌为多。


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