收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鸭病毒性肿头出血症病毒强毒生物学特性

张娜  
【摘要】: 鸭病毒性肿头出血症(Duck viral swollenhead hemorrhagic disease, DVSHD)是由鸭病毒性肿头出血症病毒(Duck viral swollenhead hemorrhagic disease virus, DSHDV)引起鸭的急性传染病。临床症状表现为病鸭头颈肿胀、眼结膜充血出血、肝脏肿大呈土黄色并伴有出血斑点、体温升至43℃以上、排草绿色稀粪等。该病发病率高死亡率高,各种年龄阶段、各品种的鸭均可感染,涉及品种有天府肉鸭、樱桃谷鸭、北京鸭等,最早3日龄开始发病,最迟500日龄仍然有发病,该病是近年来严重危害养鸭业的一种新的传染病。经过流行病学调查、病理剖解、病原的分离鉴定、超薄切片观察、理化特性测定、交叉中和试验等一系列研究,初步认为该病是由呼肠孤病毒引起的一种新型传染病,目前只有少量资料报道。 本研究对DSHDV强毒生物学特性及其免疫原性展开研究,获得以下系列结果: 1.鸭病毒性肿头出血症病毒强毒对鸭胚成纤维细胞的适应及其增殖规律:将DSHDV人工感染青年鸭成功复制出典型的临床病例,症状与之前报道一致。病毒可适应在10日龄鸭胚中增殖;将DSHDV鸭胚尿囊液感染DEF细胞,盲传2次即可适应DEF细胞,连续传代5次后细胞病变时间稳定,CPE一般出现于感染后72 h; DSHDV在DEF上的病毒滴度(TCID50)随传代次数增加而逐渐增加,到第5代时趋于稳定的水平,达到106.55-106.91/ml。病毒在接种细胞后,毒价呈现出先下降再逐渐上升的特点,0 h-8 h毒价直线下降,8 h-72 h快速上升,72 h-120 h毒价较高,是收获该DSHDV细胞毒的最适时间。 2.鸭病毒性肿头出血症病毒强毒的形态发生学和鸭胚成纤维细胞的病理变化:电镜下可见DSHDV病毒粒子呈圆形或椭圆形,无囊膜,具有双层核衣壳,成熟病毒外衣壳直径75 nm-85 nm,平均80 nm左右;病毒空衣壳直径为60 nm-75 nm;病毒粒子复制早期多散在于细胞胞浆内,随着子代病毒的增多,聚集在胞浆包涵体结构中。DSHDV病毒粒子通过吸附于DEF细胞膜表面而进入细胞,在胞浆中完成脱壳、复制和装配过程,子代病毒粒子通过细胞膜破裂的方式释放到胞外。在感染后12 h首次于细胞浆中观察到子代病毒粒子;在感染后24 h首次观察到包涵体结构。被DSHDV感染的DEF细胞的超微结构病变主要表现为:细胞核变形,染色质异常聚集,线粒体和粗面内质网严重扩张,胞浆出现大量空泡,部分细胞发生融合和凋亡变化,感染后期细胞中还出现大量的不规则形状的包涵体。 3.鸭病毒性肿头出血症病毒强毒致体外培养的鸭胚成纤维细胞凋亡:(1)光学显微镜和电子显微镜下均可观察到DSHDV诱导DEF细胞出现典型的细胞凋亡形态学变化:如细胞质浓缩,细胞核变形严重,染色质高度凝集、边缘化,内质网、线粒体空泡化,晚期出现大量大小不一、形态各异的凋亡小体;(2)琼脂糖凝胶电泳检测显示,受感染细胞的DNA降解形成的典型梯状条带;(3)Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测显示,凋亡细胞的比率从感染后24 h快速上升,96 h的达到凋亡的最高峰,而后逐渐下降,同时伴随着坏死细胞的比例逐渐升高;(4)AnnexinV-FITC/PI双标记的感染DEF细胞经荧光显微镜可观察到发出阳性荧光信号的凋亡细胞。 4.鸭病毒性肿头出血症病毒的提纯及其形态观察:通过对多种DSHDV纯化方法的比较研究,最后采取了反复冻融、差速离心、PEG 6000沉淀、30%蔗糖垫底超速离心以及CsCl不连续密度梯度离心相结合的方法对DSHDV进行纯化,结果证实该方法快速高效,纯化的病毒纯净。负染可见成熟的DSHDV病毒粒子呈球形,无囊膜,直径在80 nm-85 nm之间,表面颗粒状突起,内部有电子密度较深的区域。 5.鸭病毒性肿头出血症病毒结构蛋白分析:将纯化获得的DSHDV病毒制备成抗原多点多次免疫家兔,成功制备了兔抗DSHDV的高免血清,并通过辛酸-硫酸铵粗提及High Q阴离子交换柱纯化兔抗DSHDV的血清IgG。蛋白质变性凝胶电泳结果显示:DSHDV病毒颗粒由10条主要结构蛋白(Virus structural protein, VP)组成,分子量由大到小依次为VP1、VP2、VP3...VP10 (MW:151、129、115、90、76、66、56、52、39、35kDa);免疫印迹结果显示VP2、VP4、VP5 (MW:129、90、76kDa)三种结构蛋白具有免疫原性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张舍郁;程安春;汪铭书;;鸭病毒性肿头出血症病毒培养特性与形态观察[J];黑龙江畜牧兽医;2007年11期
2 李月红;付云红;陈奇;王永志;扈荣良;;鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定[J];中国兽医学报;2012年04期
3 黄瑜,程龙飞,李文杨,苏敬良,彭春香,庄向生,郭玉璞;测鸭出血症病毒间接免疫荧光试验的建立[J];中国兽医学报;2003年05期
4 朱海侠;万春和;黄瑜;程龙飞;施少华;傅光华;陈红梅;;鸭出血症病毒间接ELISA检测方法的建立与应用[J];中国畜牧兽医;2013年02期
5 ;血宁1号注射液治疗各种出血症初步小结[J];中草药通讯;1972年01期
6 郭云涛;;一例长毛兔急性病毒性出血症的诊治体会[J];养殖技术顾问;2013年02期
7 邓华成;安华素;熊文康;张昌华;;一例兔急性病毒性出血症的诊治[J];上海畜牧兽医通讯;2012年06期
8 祖秘全;维医治疗出血症[J];中国民族;2003年04期
9 程龙飞,黄瑜,李文杨,彭春香,庄向生;鸭出血症血凝及血凝抑制试验的建立和应用[J];中国预防兽医学报;2003年05期
10 郑日俊;服参芪而致出血症2例[J];安徽中医临床杂志;1994年01期
11 郭秀琦;蔺希昌;杜全德;赵河山;王友田;;兔“病毒性出血症”免疫的研究[J];中国畜禽传染病;1987年03期
12 魏文彬;婴儿维生素K缺乏性出血症的肝损害[J];国外医学(儿科学分册);1988年04期
13 石则艳;;上节育环后出血症的辨证施治[J];陕西中医学院学报;1988年01期
14 徐福南,席庆奎;病毒性出血症病兔下呼吸道在透射和扫描电镜下的观察[J];畜牧与兽医;1989年04期
15 周艳琴;;改善鸡日粮 防止脂肪肝[J];饲料与畜牧;1989年03期
16 周艳琴;;改善日粮避免鸡脂肪肝的发生[J];饲料工业;1989年06期
17 王忱;趙守先;;中西醫結合治療出血症(附十例報告)[J];吉林医科大学学报;1962年01期
18 万红;陈文;涂爱国;钟祝华;王健民;钟定辉;;健脾益冲汤治疗妇科出血症的临床观察[J];中国中医药现代远程教育;2016年20期
19 杨肯牧;;鸭出血症的诊治[J];湖南农业;2009年02期
20 李传峰;程安春;汪铭书;沈婵娟;张舍郁;周毅;陈孝跃;;鸭病毒性肿头出血症病毒人工感染鸭的病理学观察[J];畜牧兽医学报;2008年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张娜;程安春;汪铭书;李传锋;陈孝跃;;鸭肿头出血症病毒强毒致鸭胚原代成纤维细胞凋亡的研究[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
2 李传峰;程安春;汪铭书;沈婵娟;张舍郁;周毅;陈孝跃;;鸭病毒性肿头出血症病毒人工感染鸭的病理学观察[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
3 张舍郁;程安春;汪铭书;沈婵娟;李传峰;;间接免疫荧光检测石蜡切片中鸭肿头出血症病毒及抗原定位方法的初步建立[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
4 张娜;程安春;汪铭书;李传锋;;鸭肿头出血症病毒在鸭胚原代成纤维细胞增殖特性的研究[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
5 梁宏德;王瑞俭;杨玉荣;;兔感染出血症病毒后大肠的组织病理学观察[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
6 杨龙圣;薛家宾;王芳;徐为中;胡元亮;;病毒性出血症疫苗免疫剂量对幼兔血清抗体效价的影响[A];2007中国兔文化节“康大杯”兔业优秀科技论文、科普作品集[C];2007年
7 卢田粉;柴同杰;;羊出血症魏氏梭菌a-e毒素基因工程苗的研究[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
8 潘晓艺;蔺凌云;沈锦玉;;中华鳖病毒性肝坏死肠出血症病原研究[A];2012年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2012年
9 周捷;赵亚力;赵晓青;孙衍庆;刘继明;;家兔暴发病毒性出血症的病理诊断[A];中国实验动物学会第五届学术年会论文汇编[C];2000年
10 程安春;汪铭书;陈孝跃;周毅;刘菲;宋涌;郭宇飞;韩晓英;袁桂萍;徐超;廖永洪;方鹏飞;刘兆宇;;一种新发现的鸭病毒性肿头出血症传染病的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张娜;鸭病毒性肿头出血症病毒强毒生物学特性[D];四川农业大学;2010年
2 张亚茹;北京鸭腿部出血症发病原因和机制研究[D];中国农业大学;2018年
3 李传峰;鸭病毒性肿头出血症病毒感染特性及其免疫检测技术的研究[D];四川农业大学;2010年
4 缪佶;禽网状内皮组织增生病病毒转录组学及免疫抑制机理的研究[D];扬州大学;2016年
5 杨莘;猪繁殖与呼吸综合征病毒调控宿主应答的机制研究[D];中国农业科学院;2016年
6 郭银汉;福州地区对虾病毒病的病原诊断及流行病学[D];福建农林大学;2000年
7 周航宇;病毒无机修饰的策略及应用[D];浙江大学;2017年
8 何彪;蝙蝠病毒组学及其新病毒的发现与鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2014年
9 高飞;猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非编码区顺式作用元件的解析[D];南京农业大学;2012年
10 余志彬;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导白介素-12(IL-12)产生的分子机制研究[D];中国农业大学;2016年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈怡羚;血府逐瘀汤在治疗眼底出血症中的临床应用研究[D];浙江中医药大学;2017年
2 朱海侠;鸭出血症弱毒活疫苗免疫功能研究[D];福建农林大学;2012年
3 刘鑫;一株麻雀源坦布苏病毒全基因测序和传代研究[D];山东农业大学;2014年
4 张舍郁;IFA检测石蜡和冰冻切片中鸭病毒性肿头出血症病毒方法建立及在检测病毒鸭体内侵染规律的应用[D];四川农业大学;2007年
5 范萍萍;鸭坦布苏病毒铜陵株的分离与鉴定[D];安徽农业大学;2016年
6 韩乾忠;柔嫩艾美耳球虫病毒的鉴定及细胞内分布[D];吉林大学;2011年
7 周赵英;大鲵蛙病毒生物学特性及其感染的病理学研究[D];四川农业大学;2013年
8 李光东;鸭坦布苏病毒对1周龄雏鸭的致病性研究[D];山东农业大学;2014年
9 朱旭;传染性造血器官坏死病病毒的分离鉴定及其糖蛋白抗血清的制备和应用[D];华中农业大学;2013年
10 刘友生;我国鸭坦布苏病毒分子流行病学研究[D];江西农业大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 侬科;鱼类应激性出血症的防控措施[N];东方城乡报;2019年
2 黑龙江省宝清县中医院 王东海;应用碳类药治疗妇科非正常出血症心得[N];上海中医药报;2018年
3 叶峰;出血症的自测与治疗[N];上海中医药报;2005年
4 宁习源 许敏谦;三分钟治好六年的子宫出血症[N];广东科技报;2001年
5 晓洪;婴儿出血症防重于治[N];大众卫生报;2005年
6 肖培弘;鱼应激性出血症发病特点及预防措施[N];江苏农业科技报;2008年
7 李水银;浅谈糖尿病视网膜出血症的中医辨治[N];中国中医药报;2003年
8 宋晓莉;睡午觉有三忌[N];重庆商报;2000年
9 ;海参粥[N];家庭医生报;2003年
10 本报记者 朱华;一场鲜为人知的“病毒阻击战”[N];江西日报;2019年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978