核酸扩增技术在血液筛查中的应用研究

【摘要】：背景:输血传播性感染是重大的医学问题,为输血治疗的主要安全隐患之一。除乙型病毒性肝炎(Hepatitis B virus,HBV)、丙型病毒性肝炎(Hepatitis C virus, HCV)、人类免疫缺陷病毒( Human immunodeficiency virus,HIV)外,有新型病毒与寄生虫感染被确定与输血相关,也不断有新的检测方法被应用于血液筛查。 目的:比较酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和核酸扩增技术(Nucleic acid amplification testing,NAT)对成都市无偿献血者HBV、HCV和HIV的筛查效果,对核酸扩增技术在血液筛查应用情况进行分析,评价其应用价值,并为今后无偿献筛查中开展常规NAT的推广应用提供参考依据。 方法:以成都市血液中心2010年9月20日至2011年3月9日期间的68344名无偿献血者为研究对象,肘静脉取血经乙二胺四乙酸抗凝后分离血浆,利用ELISA对血样HBV、HCV、HIV和梅毒螺旋体感染情况分别用国产试剂和进口试剂进行初检和复检,并检测谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)水平。对于ELISA两次检验为阴性并且ALT≤40U/L的血样,利用COBAS s 201系统(Roche diagnostics, COBAS(?) AmpliPrep(?) / TaqMan(?) )的Hamilton STAR混样仪进行6人份血样混合、COBAS Ampliprep核酸纯化加样仪自动提取DNA或RNA、COBAS TaqMan荧光PCR仪进行PCR扩增、PDM Server服务器进行数据分析,完成对HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的核酸检测。若6人份混样的微汇集池NAT(Minipool-NAT)呈反应性,分拆行单样本NAT(Individual-NAT,ID-NAT)检测反应性样本,以COBAS TaqScreen MPX检测试剂盒确认检测。 结果:ELISA检测结果显示,68344名无偿献血者的血样中有94.84%(64820/68344)的血浆病毒反应呈阴性,其余5.16%(3524/68344)的血样经国产或/和进口试剂检验呈阳性。3524份ELISA检测阳性的血样中,22.36%(788/3524)的血样乙肝表面抗原(HBsAg)检测为阳性,21.03%(741/3524)抗-HCV检测阳性,5.62%(198/3524)抗-HIV检测阳性,22.59%(796/3524)抗-TP检测阳性, 28.41%(1001/3524)的血样ALT≥40U/L。对ELISA两次检测反应呈阴性的64820份标本中容量为200,300ml的22139份标本进行NAT检测,6人份混合样本NAT反应呈阳性为31份,经拆分单样本NAT检测后阳性数为19份, ELISA漏检率为0.086%(19/22139)。19份NAT检测反应呈阳性的血样经卫生部临检中心鉴定显示,HBV DNA阳性率为84.21%(16/19),HCV阳性率为15.79%(3/19),未检测出HIV阳性血样。 结论:核酸扩增技术灵敏度高,可减少传统酶联免疫吸附实验筛查血液病毒的漏检率,可用于无偿献血的血液病毒筛选ELISA检测阴性血样的补充检测。