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分支杆菌噬菌体D29裂解酶gp10的克隆表达及抗菌活性鉴定

熊玉霞  
【摘要】:研究目的:克隆表达分支杆菌噬菌体D29裂解酶gp10,观察该重组裂解酶对脓肿分支杆菌等多重耐药菌的抑菌作用,为开发治疗多重耐药菌感染的药物打下基础。 方法:以噬菌体D29基因组DNA为模板,用PCR扩增gp10基因片段,克隆入PET32a质粒,构建重组原核表达载体PET32a-gp10,转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。SDS—PAGE分析表达蛋白的相对分子质量和表达形式,离子交换层析纯化重组蛋白后,用杯碟法测定其抗菌活性。 结果:PCR扩增获得长1454bp的gp10基因片段,经PCR、双酶切及测序证明重组质粒PET32a-gp10构建正确。SDS-PAGE显示表达蛋白相对分子量约为54.8KD,与预期相符;目的蛋白在表达上清,碎菌上清和碎菌沉淀中均可见,纯化后均一性可达90%。杯碟法测定重组蛋白对脓肿分支杆菌出现抑菌环,对金黄色葡萄球菌没有抑菌环。 结论:重组分支杆菌噬菌体D29裂解酶gp10对脓肿分支杆菌有明显的抑菌作用,为治疗脓肿分支杆菌感染提供了新路径。


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