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黄连作用鼠疫耶尔森菌的分子机制研究

张静玲  
【摘要】:目的:鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌引起的人类历史上最具灾难性的疾病之一,它广泛存在于亚洲,非洲,美洲等地,这种动物源性疾病的爆发给公共卫生事业带来了巨大的威胁。由于人鼠疫的不断发生,世界卫生组织将其定义为“重新抬头的疾病”。 腺鼠疫能够被抗生素的及时治疗而控制。然而肺鼠疫和鼠疫性败血症很难得到救治,近年来多重耐药鼠疫菌的出现,使得我们不能只依靠抗生素的治疗了。寻找一种新的药物来治愈这种致死性的疾病成为我们的迫切需要。 传统中药,已经有几千年的历史了,它提供了一种非常独特的理论和实践技术来治愈疾病,特别是抗微生物感染领域。黄连作为中医的处方药已经使用了两千多年,它主要用于抗感染这一方面,比如在急性胃肠炎、霍乱与杆菌性痢疾治疗等,它的抗菌,抗病毒,抗炎的作用明显,且具有来源广泛与价格低廉等方面的优势,因而可以作为辅助治疗鼠疫感染的候选药物。 对于中药的抗菌分子机制我们有必要进行深入的探讨并尝试开发新的抗菌药物。基因组序列的获得以及基因芯片技术对于鼠疫菌转录水平的研究为我们提供了很好的平台,因此,我们试图通过基因芯片技术来探讨黄连作用于鼠疫菌的转录水平的机制研究,将有助于我们了解中药的抗菌分子机制并为我们消灭这种致死性的疾病提供一定的理论依据。 方法:在本研究中,我们通过液体稀释法检测黄连作用鼠疫菌的最小抑菌浓度,应用10倍最小抑菌浓度作用鼠疫菌30分钟后,提取RNA并反转录为cDNA,染色标记后与鼠疫菌DNA芯片杂交,芯片扫描处理后,进行表达谱分析并通过实时荧光定量PCR的方法进行验证。 结果:1.成功的扩增出4005个鼠疫菌基因,构建了鼠疫菌的全基因组芯片。2.在黄连的作用下,鼠疫菌全基因组范围内360个基因发生不同程度的改变,其中333条基因上调,27个下调。3.表达谱的结果与实时荧光定量PCR的结果相关系数为0.92。 讨论:结果显示全基因组范围内,黄连作用于鼠疫菌的基因转录方面的改变,与细胞膜功能相关的基因变化最显著,其次是代谢方面的以及转运结合蛋白相关的夜发生了比较大的改变,本研究揭示了黄连作用于鼠疫菌的转录水平的改变,并为中药作用鼠疫菌的分子机制研究提供了一定的理论基础。


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