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芍药苷对胆红素诱导海马神经元凋亡及NF-κB活性的影响

朱叶芳  
【摘要】:目的: 探讨芍药苷(paeoniflorin, PF)对胆红素诱导原代培养胎鼠海马神经元凋亡和核转录因子-κB(Nuclear transcription factor-κB, NF-κB)活化的影响,及调控凋亡的可能机制。 方法: 取胎龄17~19 d大鼠的海马神经元进行细胞培养,于原代培养第7天完全随机分为:正常对照组(加DMSO)、胆红素组(加10μg/ml胆红素)和经芍药苷预处理的胆红素组,后者再按所用芍药苷的剂量分为PF 1组、PF 2.5组、PF 5组,分别用1μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml的芍药苷预处理24 h后弃去,再加入胆红素。经MTT法测定海马神经元存活率及Hoechst33342 DNA染色法观察神经元凋亡形态和凋亡率后,筛选出芍药苷预处理的适当剂量;进而采用Annexin V-FITC/PI双染色法观察此剂量芍药苷对胆红素诱导神经元凋亡形态和凋亡率的影响,并采用免疫细胞化学法检测胆红素作用后不同时间(3, 6, 12, 24 h)神经元内NF-κB蛋白表达的变化。 结果: (1)与正常对照组比较,胆红素作用24 h可显著降低海马神经元存活率并升高神经元凋亡率(P≤0.001)。 (2)与胆红素组比较,PF(1, 5μg/ml)预处理24 h可显著降低海马神经元凋亡率(P0.01),但不能明显提高神经元存活率(P0.05),而PF(2.5μg/ml)预处理24 h可显著提高海马神经元存活率,降低神经元凋亡率(P0.01)。 (3)与正常对照组比较,胆红素作用3~12 h引起NF-κB活化增加(P 0.05),但以3~6 h显著(P 0.05);而采用2.5μg/ml芍药苷预处理24 h可显著抑制3~6 h NF-κB的活化(P 0.05)。 结论: (1)胆红素诱导的NF-κB活化有时间依赖性,在其作用3~6 h达高峰,胆红素诱导海马神经元凋亡可能与此时期的NF-κB活化相关; (2)芍药苷(2.5μg/ml)预处理24 h可抑制胆红素诱导的海马神经元凋亡,可能与抑制胆红素作用3~6 h时神经元NF-κB的活化有关。


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