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诱导小鼠破骨前体细胞成熟分化的实验条件探讨

王信  
【摘要】:目的:探讨小鼠单核细胞RAW264.7能否在RANKL诱导下向破骨细胞成熟分化。 方法:RANKL作用RAW264.7细胞9天~15天,光镜、透射电镜、扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)分别观察其细胞形态学变化,用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase ,TRAP)染色法观察TRAP阳性的多核细胞,RT-PCR检测破骨细胞表型和功能基因表达变化情况,扫描电镜观察破骨细胞在骨片上形成骨吸收陷窝。 结果:光镜、透射电镜下可见细胞胞体增大,为椭圆形或不规则形,胞核5~10个,扫描电镜下可见细胞表面大量的伪足样突起;此外,RANKL能诱导RAW264.7细胞分化为TRAP染色阳性的多核破骨细胞,细胞多为超过5个核的多核巨细胞;RAW264.7细胞成熟分化后具有骨吸收功能,并且能上调Cathepsin-K、TRAP、RANK等典型破骨细胞表型和功能基因mRNA的表达。 结论:RAW264.7细胞是一种较好的破骨前体细胞模型,单用50ng/mL的RANKL体外连续诱导9天以上,能明显促进它向成熟的破骨细胞分化。


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