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RhaFGF联合rhEGF促进兔耳全层皮肤缺损创面愈合的实验研究

张敏珠  
【摘要】:目的:观察重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)联合重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)对创面愈合的影响并探讨其可能的机理。 方法:①造模及分组:建立新西兰大耳白兔兔耳全层皮肤缺损模型,先后进行浓度梯度实验和联合用药实验。在浓度梯度实验中,建立兔耳全层皮肤缺损创面模型,随机分为A组(rhaFGF 60U/cm~2)、B组(rhaFGF 90U/cm~2)、C组(rhEGF 20U/cm~2)、D组(rhEGF 40U/cm~2)和E组(等量生理盐水)共5组。根据浓度梯度实验结果设定联合用药实验试剂的浓度。联合用药实验建立模型同前,随机分为F组(rhaFGF 60U/cm~2+rhEGF 20U/cm~2)、G组(rhaFGF 60U/cm~2)、H组(hbFGF 60U/cm~2)和I组(等量生理盐水)共4组。②实验方法:造模后即开始用药,每隔两日按不同分组将试剂外用于创面。③实验评估:采用透明膜描记法记录造模后第3、7、10、14d创面愈合面积,计算出创面愈合率,记录创面愈合时间。分别比较A、B、E组,C、D、E组的创面愈合率和愈合时间。联合用药实验,在第3、7、14d取创面组织,分别用HE染色、免疫组织化学检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达变化规律,观察不同时相点创面愈合情况。 结果:①创面愈合时间。A组创面平均愈合时间为(13.57±0.40)d,在第7、10、14d创面愈合率与E组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。C组创面平均愈合时间为(14.01±0.25)d,在第7、10、14d创面愈合率与E组比较差异具有统计学意义(P0.05)。联合用药实验中,F组创面平均愈合时间为(13.33±0.12)d,与I组比较差异具有统计学意义(P0.05)。各个时相点,其创面愈合率与I组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。②HE染色。造模后第3、7d,F和H组创面成纤维细胞(FB)、毛细血管生成较G、I组丰富。第14d,F组创面基本愈合,FB、毛细血管较其他对照组少;H组尚未完全愈合,其创面中FB增殖活跃,毛细血管数较多;G组组织学情况介于F、H组之间;各用药组的愈合情况优于I组。③MMP-1免疫组织化学。在造模后的第3d,各组已开始表达MMP-1,但无明显差异(P0.05)。第7d,各组MMP-1含量均达峰值。与I组相比较,F组差异显著具有统计学意义(P0.01),G、H组差异具有统计学意义(P0.05)。第14d,各组MMP-1量下降,F、G组显著少于I组且差异具有统计学意义(P0.05)。在各组之中,H组表达最多,但与I组相比不具统计学意义(P0.05)。④VEGF免疫组织化学。造模后第3d,各组VEGF蛋白表达未见明显差别(P0.05)。第7d,各组VEGF表达达高峰,与I组相比较,F组差异具有显著统计学意义(P0.01),G、H组差异具有统计学意义(P0.05)。第14d,各组VEGF下降。F组显著少于I组,差异具有统计学意义(P0.01)。G组少于I组,差异具有统计学意义(P0.05),H组表达在各组中最多但与I组相比差异无统计学意义。④VEGF mRNA RT-PCR结果。第3d,各组mRNA表达未见明显差异;第7d时,F、G组与I组比较差异具有显著统计学意义(P0.01),H组差异具有统计学意义显著(P0.05);第14d,各组表达均有下降,但F、G组与I组相比,差异具有统计学意义(P0.05),H组表达在各组中最多但与I组相比差异无统计学意义。 结论:①F组对兔耳创面愈合有促进作用,可促进创面肉芽组织生长、毛细血管形成与再上皮化形成。②其促进创面愈合机制可能是在早期通过上调VEGF mRNA的表达、增加创面中VEGF和MMP-1量。在晚期,下调VEGF mRNA的表达、降低创面中VEGF和MMP-1的含量,可能是其减少瘢痕形成的机制。③联合应用细胞因子(rhaFGF+rhEGF)优于单独用药。


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