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PDTC对喉癌循环肿瘤细胞的影响及其机制研究

康苧心  
【摘要】:第一部分PDTC对喉癌循环肿瘤细胞的影响 目的:利用喉癌裸鼠模型,检测核因子(NF-κB)在喉癌裸鼠模型中的表达情况,了解核因子(NF-κB)与喉癌裸鼠模型中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)发生的相关性。探讨PDTC对喉癌裸鼠模型中循环肿瘤细胞的作用, 方法:选取4周龄BALB/c-nu裸鼠60只,将其随机分为实验组(20只),对照组(20只)及空白组(20只)。实验组为PDTC组,在接种喉癌细胞后第七天开始按终浓度(100mg/kg)腹腔给药(0.2~0.3ml).对照组为生理盐水组(等量生理盐水),空白组不予接种喉癌细胞。在裸鼠右颈部皮下接种喉癌Hep-2细胞悬液0.2ml。PDTC组及对照组40只裸鼠均成功成瘤。待肿瘤生长8周,处死裸鼠,取出肿瘤组织并取血。肿瘤组织常规HE染色。以CK-19为标志物检测喉癌裸鼠模型中循环肿瘤细胞表达情况,免疫组化法检测核因子(NF-κB)在喉癌组织中的表达,NF-κB激活时由细胞质转到细胞核内,因此以肿瘤细胞核的棕黄色阳性染色反映NF-κB的激活情况。 结果: 1.核因子(NF-κB)在喉癌组织中的表达率为65%(26/40)。在CTC表达阳性的喉癌组织中,NF-κB阳性率为90%(9/10),而在CTC表达阴性的喉癌组织中,NF-κB阳性率为56.7%(17/30),通过检验CTC与喉癌组织中NF-κB表达率之间无明显关联。但在NF-κB活性被激活的裸鼠模型中,CTC阳性率为75%(9/12), NF-κB活性未被激活的裸鼠模型中,CTC阳性率为3.5%(1/28)。说明喉癌裸鼠模型中CTC发生与NF-κB是否具有活性有关。 2. PDTC组CTC阳性率5%(1/20) ,对照组CTC阳性率45%(9/20),两组间CTC阳性率有明显差异(P0.005)。 结论: 1.喉癌裸鼠模型中,循环肿瘤细胞的发生和核因子(NF-κB)的表达无明显相关,但与核因子(NF-κB)是否具有活性有关。 2. PDTC可抑制喉癌组织中NF-κB的激活,减少喉癌裸鼠模型中CTC的发生率。第二部分PDTC对喉癌循环肿瘤细胞影响的相关机制研究 目的:利用喉癌裸鼠模型,观察PDTC使用后,对喉癌组织中VEGF-C和MMP-9mRNA表达的影响,探讨其对喉癌循环肿瘤细胞可能的作用机制,为喉癌的临床治疗提供新思路。 方法:选取4周龄BALB/c-nu裸鼠60只,将其随机分为实验组(20只),对照组(20只)及空白组(20只)。实验组为PDTC组,在接种喉癌细胞后第七天开始按终浓度(100mg/kg)腹腔给药(0.2~0.3ml).对照组为生理盐水组(等量生理盐水),空白组不予接种喉癌细胞。在裸鼠右颈部皮下接种喉癌Hep-2细胞悬液0.2ml。PDTC组及对照组40只裸鼠均成功成瘤。待肿瘤生长8周,处死裸鼠,取出肿瘤组织测量其体积并取血。以CK-19为标志物检测裸鼠模型中循环肿瘤细胞表达情况,荧光定量PCR检测各组喉癌组织中VEGF-C和MMP-9mRNA的表达。 结果:PDTC组的肿瘤生长受到明显抑制,其体积与对照组差异有统计学意义(P0.01);PDTC组喉癌组织中VEGF-C和MMP-9mRNA的表达较对照组有明显减少。 结论:PDTC可抑制喉癌组织中NF-κB的激活,减少喉癌裸鼠模型中CTC的发生率,其作用可能得益PDTC降低了喉癌发生转移的能力,其机制可能为PDTC通过抑制NF-κB活性而使VEGF-C和MMP-9表达下调,减少肿瘤组织新生血管及降低喉癌侵袭力有关。


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