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干扰细胞周期对HepG_2细胞顺铂耐药影响的观察

朱振双  
【摘要】:目的利用p15-shRNA表达载体干扰周期相关基因p15,探讨细胞周期干扰对HepG_2细胞株顺铂耐药的影响。 方法采用浓度递增法用顺铂(Cisplatin,CDDP)逐步诱导肝癌细胞株HepG_2耐药并建立动态耐药模型HepG_2/CDDP/2.0;采用脂质体法将p15-shRNA(Y1,Y2,Y3)和阴性对照shRNA-F转染至HepG_2/CDDP/2.0细胞,RT-PCR筛选最佳干扰片段;MTT法检测转染前后HepG_2/CDDP/2.0对细胞生长的影响、流式细胞仪分析转染后HepG_2/CDDP/2.0细胞的周期分布;Western blot检测p15、Bax、Bcl-2的蛋白表达。 结果(1)成功建立了肝癌细胞的动态耐药模型(2)RT-PCR检测结果显示shRNAY3干扰效果最好(3) MTT结果显示shRNA转染HepG_2/CDDP/2.0细胞后,细胞存活率明显增加(4)流式细胞仪分析结果显示p15-shRNA转染HepG_2/CDDP/2.0细胞后,G1期细胞比例明显减少(5) Western blot结果显示p15表达降低、Bax表达降低、Bcl-2表达增加。 结论在HepG_2/CDDP/2.0耐药过程中,随着耐药时间的延长,细胞G1期比例增加。抑制p15表达可明显降低细胞G1期的比例,同时由于Bax表达降低、Bcl-2表达增加,细胞凋亡降低,利用shRNA抑制p15表达,改变HepG_2/CDDP/2.0细胞周期未能明显改变其对顺铂的耐药性。


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